納豆激酶高產(chǎn)菌株篩選及發(fā)酵工藝優(yōu)化研究.pdf

1、納豆激酶（Nattokinase簡(jiǎn)稱NK）是由納豆芽孢桿菌（Bacillus subtils natto）代謝產(chǎn)生的一種絲氨酸蛋白，于1987年由日本學(xué)者須見(jiàn)洋行在納豆食品中發(fā)現(xiàn)并取名。納豆激酶具有良好的溶解血栓的功效，與傳統(tǒng)的溶栓藥物鏈激酶、尿激酶相比具有藥理作用直接且多元化、體內(nèi)半衰期長(zhǎng)、分子量相對(duì)較小可直接通過(guò)胃腸系統(tǒng)被人體吸收、安全性高、價(jià)格便宜等諸多優(yōu)點(diǎn)。因此就如何提高納豆激酶活性這一研究在世界范圍內(nèi)引起普遍關(guān)注。 本

2、實(shí)驗(yàn)從日本進(jìn)口的納豆食品中分離得到了一株產(chǎn)納豆激酶較高的菌株，并通過(guò)紫外線照射對(duì)該菌株實(shí)施誘變，根據(jù)納豆芽孢桿菌致死曲線確定菌株的誘變照射時(shí)間。經(jīng)多次誘變之后，得到產(chǎn)酶能力更高的菌株（暫命名YNS-1）。 以篩選誘變后的高產(chǎn)菌株為出發(fā)菌株，對(duì)高產(chǎn)納豆激酶發(fā)酵培養(yǎng)基組成及培養(yǎng)條件實(shí)施優(yōu)化，優(yōu)化后的發(fā)酵培養(yǎng)基成分及培養(yǎng)條件如下：發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳氮源為發(fā)芽豆粉，添加量為8g/100mL；最佳碳源為葡萄糖，添加量為2％；MgSO4最佳添

3、加量為0.05％；最適發(fā)酵溫度為38℃；最適pH為7；發(fā)酵菌種培養(yǎng)24h接種，接種量為2％；采用搖瓶發(fā)酵時(shí)，搖床轉(zhuǎn)速最佳值為150r/min，三角瓶的裝液量為200mL/500mL，經(jīng)過(guò)三天發(fā)酵，納豆激酶的酶活力達(dá)到最大值。 最后通過(guò)對(duì)比性實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證了經(jīng)誘變后的菌株在優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基中具有最高的酶活產(chǎn)量，酶活力可以達(dá)到846IU/mL，與實(shí)驗(yàn)室原有菌株在普通發(fā)酵培養(yǎng)基內(nèi)相比，酶活力提高了53.23％。從而以證明，本實(shí)驗(yàn)經(jīng)過(guò)菌株篩選