肌肽滴眼液抑制糖尿病大鼠晶狀體混濁的作用.pdf

1、目的： 1．建立具有穩(wěn)定、持久高血糖并且適用于研究糖尿病性白內(nèi)障的動(dòng)物模型。 2．觀察糖尿病性白內(nèi)障形成過(guò)程中晶狀體混濁變化和相關(guān)生物化學(xué)改變。 3．探討肌肽（carnosine, Car）作為糖基化抑制物對(duì)糖尿病性白內(nèi)障的作用及機(jī)制。 方法： 1．體重120±20g 的雄性SD 大鼠50 只，給予一次性腹腔注射10 g/L 鏈脲佐菌素（STZ，Sigma 公司）65 mg/kg（溶解于0.02

2、mol/L 枸櫞酸鈉緩沖液，pH 4.5），隨機(jī)選擇同齡SD 大鼠5 只作為正常組，注射等量0.02mol/L 枸櫞酸鈉緩沖液（pH 4.5）；注射STZ 72 h 后血糖大于14 mmol/L者為糖尿病大鼠。 2．將糖尿病大鼠隨機(jī)分為低濃度肌肽治療組（Car 5 g/L）、高濃度肌肽治療組（Car 10 g/L）和糖尿病組（diabetic rats, Db），分別給予新鮮配制的5 g/L 肌肽滴眼液、10 g/L 肌肽滴眼液

3、（25 mmol/L 磷酸鈉緩沖液，pH 7.4）和25 mmol/L 磷酸鈉緩沖液（pH 7.4）點(diǎn)眼，2 次/d。實(shí)驗(yàn)中每4 wk 測(cè)血糖，血糖始終大于14 mmol/L 者納入實(shí)驗(yàn)。血糖回退至14mmol/L 以下或死亡者剔除實(shí)驗(yàn)。每周檢測(cè)體重。 3．用1％濃度復(fù)方托品酰胺眼液散瞳，吸入乙醚麻醉后，使用瑞士產(chǎn)BQ900裂隙燈監(jiān)測(cè)大鼠晶狀體混濁情況。每周觀察1 次并記錄。分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)參考牛津大學(xué)眼科實(shí)驗(yàn)室晶狀體分級(jí)方法。

4、 4． STZ注射后第13wk，脫頸法處死所有大鼠，摘除大鼠雙眼，分離晶狀體后，稱(chēng)重標(biāo)記置入Eppendorf，保存于－70 ℃待用。測(cè)量晶狀體谷胱甘肽（glutathione, GSH）和糖基化終產(chǎn)物（advanced glycation end products,AGEs）的含量，谷胱甘肽還原酶（glutathione reductase, GR）、過(guò)氧化氫酶（catalase, CAT）的活性。 結(jié)果： 1．注射S

5、TZ 后72 h，糖尿病大鼠血糖（Db 組33.64±1.76 mmol/L）較正常大鼠血糖（6.8±0.62 mmol/L）顯著升高（P<0.05）。在實(shí)驗(yàn)各個(gè)時(shí)間點(diǎn)，Db 組大鼠始終保持高血糖和較低體重。肌肽眼液對(duì)糖尿病大鼠血糖及體重?zé)o明顯影響； 2．實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，正常大鼠晶狀體始終保持透明。STZ 注射后第4wk，糖尿病大鼠晶狀體開(kāi)始發(fā)生混濁，混濁程度呈雙相性進(jìn)展，第4wk 至第8wk呈緩慢進(jìn)展，而后5wk 呈快速進(jìn)展。糖尿

6、病大鼠晶狀體混濁程度明顯重于正常大鼠，而肌肽眼液明顯延緩了糖尿病大鼠的晶狀體混濁。在第4wk 治療組大鼠晶狀體混濁程度較未治療組大鼠低1－2 級(jí)（0 級(jí)vs.2 級(jí)；P<0.05）。 3．STZ 注射后第13wk，以正常組大鼠為標(biāo)準(zhǔn)，糖尿病大鼠晶狀體CAT 的活性下降52％（31.3 μmol/g 晶狀體蛋白， P<0.05），GR 的活性下降51％（5.7 μmol/g 晶狀體蛋白，P<0.05），GSH 含量降低56％（57

7、.5 mg/g晶狀體蛋白，P<0.05），而AGEs 的含量增加29％（1.2 mmoles HMF/mole晶狀體蛋白，P<0.05）。而肌肽眼液明顯抑制了這種變化的發(fā)生。STZ注射后第13wk，低濃度肌肽治療大鼠比糖尿病大鼠晶狀體CAT 的活性高30％（18.0 μmol/g 晶狀體蛋白， P<0.05），GR 的活性高19％（2.1μmol/g 晶狀體蛋白，P<0.05），GSH 含量增加21％（21.1 mg/g 晶狀體蛋白，P

8、<0.05），而AGEs 的含量降低34％（1.4 mmoles HMF/mole 晶狀體蛋白，P<0.05）。高濃度肌肽治療大鼠比糖尿病大鼠晶狀體CAT的活性高37％（22.4 μmol/g 晶狀體蛋白，P<0.05），GR 的活性高44％（4.9 μmol/g 晶狀體蛋白，P<0.05），GSH 含量增加31％（31.1 mg/g晶狀體蛋白，P<0.05），而AGEs 的含量降低48％（2.0 mmoles HMF/mole晶狀體蛋

9、白，P<0.05）。這提示：肌肽具有保護(hù)晶狀體內(nèi)CAT、GR 的活性，增加GSH 含量及抑制糖基化終產(chǎn)物形成的作用。 結(jié)論： 一次性腹腔注射STZ（65 mg/kg）可誘導(dǎo)成年大鼠出現(xiàn)穩(wěn)定、長(zhǎng)期的高血糖，成為顯性糖尿病大鼠，并且可誘導(dǎo)糖尿病性白內(nèi)障形成。 肌肽滴眼液可抑制糖尿病大鼠早期的晶狀體混濁，這種抑制作用可能與肌肽保護(hù)晶狀體內(nèi)的抗氧化酶的失活，抑制糖基化終產(chǎn)物的形成相關(guān)。 創(chuàng)新點(diǎn): 首次采用