肌肽與阿司匹林滴眼液聯(lián)合滴眼對(duì)糖尿病大鼠眼組織的影響.pdf

1、世界衛(wèi)生組織1995年統(tǒng)計(jì)，全世界因白內(nèi)障致盲的患者約1700萬(wàn)，國(guó)內(nèi)也有500萬(wàn)以上。白內(nèi)障是我國(guó)乃至世界首位致盲性疾病，盡管手術(shù)治療白內(nèi)障的技術(shù)在不斷完善，但不可避免的手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)、嚴(yán)重的術(shù)后并發(fā)癥以及由此而引起的經(jīng)濟(jì)問(wèn)題等，仍難以解決與日俱增的白內(nèi)障患者的需要，美國(guó)國(guó)立眼科研究所曾推算，如果能延緩10年白內(nèi)障的發(fā)生，可減少50％白內(nèi)障手術(shù)。因此，尋找有效的抗白內(nèi)障藥物具有重要的科學(xué)意義和社會(huì)效益。隨著生活水平不斷提高和人口老齡化，世界

2、糖尿病患者日漸增多，糖尿病性白內(nèi)障患者也在增加，所以研究糖尿病性白內(nèi)障的發(fā)病機(jī)制和潛在的藥物治療方法，具有非常重要的價(jià)值。然而白內(nèi)障的藥物治療仍然面臨著嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。90年代以來(lái)，有關(guān)防治STZ－糖尿病白內(nèi)障藥物的研究引人注目，但尚處于實(shí)驗(yàn)階段。盡管近40多種抗白內(nèi)障藥物被廣泛的臨床使用，但證明其有效性的直接證據(jù)甚少，可能有效的藥物治療白內(nèi)障的手段將是聯(lián)合用藥的方法。已證明肌肽具有抗衰老及防治年齡相關(guān)性疾病的作用且有抗白內(nèi)障的作用；小劑量

3、阿司匹林可用于控制血糖，也有報(bào)道用于糖尿病性白內(nèi)障的治療，且廉價(jià)方便，副作用少，有望達(dá)到預(yù)期的效果。我們前期的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果提示肌肽和阿司匹林滴眼液，對(duì)大鼠早期糖尿病性白內(nèi)障有一定的抑制作用，因此，本實(shí)驗(yàn)將研究肌肽與阿司匹林聯(lián)合是否有更明顯的作用。
　　谷胱甘肽是普遍存在的含巰基的三肽，它在細(xì)胞生物化學(xué)中起到重要的作用。它的功能有清除自由基和其它活性物質(zhì)，調(diào)節(jié)DNA和蛋白質(zhì)的合成，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、免疫應(yīng)答和細(xì)胞因子，還調(diào)

4、節(jié)許多其它的代謝途徑。在晶狀體、角膜、視網(wǎng)膜和其它眼組織中谷胱甘肽的含量會(huì)隨著年齡、白內(nèi)障、糖尿病、射線和一些藥物的攝入等因素而有所改變。
　　另外，篩選防治糖尿病性白內(nèi)障藥物，國(guó)外研究者一般多選用STZ－糖尿病模型，因?yàn)樗l(fā)病緩慢，觀察時(shí)間較長(zhǎng)，與人糖尿病性白內(nèi)障形成有許多相似之處，目前是國(guó)內(nèi)外研究糖尿病性白內(nèi)障發(fā)病機(jī)制與藥物防治較常選用的模型。
　　目的：
　　1.探討肌肽與阿司匹林滴眼液聯(lián)合使用對(duì)STZ誘導(dǎo)的糖尿

5、病性白內(nèi)障形成過(guò)程的作用。
　　2.探討肌肽與阿司匹林滴眼液聯(lián)合使用對(duì)糖尿病性大鼠晶狀體、角膜及視網(wǎng)膜中巰基化合物（GSH和蛋白質(zhì)）的變化的影響。
　　方法：102只大鼠晶狀體經(jīng)裂隙燈檢查后，剔除任何有晶狀體疾病者。隨機(jī)抽取12只正常大鼠作為正常對(duì)照組，其它的接受1％STZ（65mm/kg）枸櫞酸緩沖液（20mmol/L，pH4.5）腹腔注射。96小時(shí)后取尾血檢測(cè)大鼠血糖，血糖大于14mmol/L的大鼠作為糖尿病大鼠。治療組

6、大鼠分為3組：C組接受1％肌肽磷酸鈉緩沖液（25mmol/L，pH7.4）滴雙眼，2/日；D組接受0.05％阿司匹林磷酸鈉緩沖液（25mmol/L，pH7.4）滴雙眼，2/日；E組接受1％肌肽磷酸鈉緩沖液和0.05％阿司匹林磷酸鈉緩沖液（25mmol/L，pH7.4）交替滴眼，雙眼，各2/日。監(jiān)測(cè)血糖、尿糖及體重的變化。通過(guò)裂隙燈觀察并記錄所有大鼠雙眼晶狀體形成白內(nèi)障的過(guò)程。根據(jù)英國(guó)牛津大學(xué)眼科實(shí)驗(yàn)室方法將晶狀體混濁度進(jìn)行分級(jí)。第8周時(shí)

7、將所有大鼠處死，分離出晶狀體用于測(cè)定其水溶性蛋白質(zhì)、巰基化合物（谷胱甘肽和蛋白質(zhì)）的含量，和谷胱甘肽還原酶（GR）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GPx）及過(guò)氧化氫酶（CAT）的活性；分離出角膜及視網(wǎng)膜用于測(cè)定其水溶性蛋白及巰基化合物（谷胱甘肽和蛋白質(zhì)）的含量。
　　結(jié)果：約84.4％的大鼠接受STZ注射96小時(shí)后血糖>14mmol/L。糖尿病大鼠的血糖及尿糖明顯高于對(duì)照組（P<0.05），而體重明顯低于對(duì)照組（P<0.05）。糖尿病未治療

8、組大鼠成模后的第4周晶狀體出現(xiàn)明顯的混濁，混濁度等級(jí)以中位數(shù)表示為0（0～1）。糖尿病治療組大鼠成模后第5周晶狀體才出現(xiàn)明顯的混濁，晶狀體混濁度等級(jí)以中位數(shù)均為0（0～1）。在各組滴眼液治療組大鼠和未治療組大鼠之間，晶狀體混濁程度前者出現(xiàn)和發(fā)展都明顯低于后者（P<0.05），且在第8周時(shí)，聯(lián)合治療組晶狀體的混濁程度明顯比未治療組和阿司匹林治療組的低（P=0.002，E組VSB組；P=0.04，E組VSD組）。
　　在糖尿病未治療組

9、和正常對(duì)照組之間比較，大鼠晶狀體中水溶性蛋白質(zhì)含量[g/L，1.65±0.22VS2.10±0.14，(P<0.001)]及巰基化合物（GSH和蛋白質(zhì)）含量[mg/gprot，89.64±18.63VS117.56±24.25，(P=0.002)]有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。糖尿病治療組晶狀體中水溶性蛋白的含量較未治療組高，但均未有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異[g/L，C組：1.72±0.18VS1.65±0.22(P=0.35)，D組：1.74±0.10V

10、S1.65±0.22(P=0.22)，E組：1.79±0.17VS1.65±0.22(P=0.08)；VSB組]；CAT的活性前者也都高于后者，而只有C組的活性與未治療比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.046）。比較治療組與未治療組大鼠晶狀體中巰基化合物的含量，前者都高于后者，但均未有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異[mg/gprot，C組：97.47±22.00VS89.64±18.63(P=0.34)，D組：91.93±7.14VS89.64±18.63(

11、P=0.77)，E組：100.40±13.50VS89.64±18.63(P=0.27)；VSB組]。GR活性，治療組也都高于未治療組而低于正常對(duì)照組，但均未有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。GPx的活性，糖尿病組均高于正常對(duì)照組，且都存在統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異[U/gprot，C組：31.31±5.06VS17.28±5.19(P<0.001)；D組：34.38±4.64VS17.28±5.19(P<0.001)；E組：26.21±6.99VS17.28±5

12、.19(P=0.001)]；同時(shí)，治療組又低于未治療組，也有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異[C組：31.31±5.06VS46.14±4.77(P<0.001)；D組：34.38±4.64VS46.14±4.77(P<0.001)；E組：26.21±6.99VS46.14±4.77(P<0.001)]；另外，E組的活性明顯低于D組，有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.001）。C組中水溶性蛋白質(zhì)含量（g/L，C組：1.72±0.18，E組：1.79±0.17

13、）和巰基化合物含量（mg/gprot，C組：97.47±22.00，E組：100.40±13.50）低于E組，而CAT、GR和GPx的活性C組均高于E組。
　　在視網(wǎng)膜中巰基化合物的含量，未治療組低于正常對(duì)照組。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示肌肽組與阿司匹林組均高于正常對(duì)照組，它們之間均存在明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），并且這兩組與未治療組之間也存在著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，且前者高于后者。然而，聯(lián)合治療組的含量卻低于正常對(duì)照組，也低于未治療組，但均

14、未有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　在角膜中，肌肽治療組的巰基化合物含量與正常對(duì)照組相比是增加的，而其它各組的含量都是下降的，而且，在肌肽治療組和未治療組之間存在明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。
　　結(jié)論：STZ腹腔注射建立的糖尿病性白內(nèi)障大鼠模型，是研究糖尿病性白內(nèi)障的理想模型。局部應(yīng)用肌肽和阿司匹林滴眼液是安全和簡(jiǎn)便的，可以應(yīng)用于篩選其他防治糖尿病性白內(nèi)障藥物研究中。糖尿病大鼠晶狀體內(nèi)巰基化合物（GSH和蛋白質(zhì)）的含量，GR與CAT

15、的活性明顯降低，GPx活性增高。這為糖尿病性晶狀體氧化應(yīng)激學(xué)說(shuō)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。在糖尿病早期，肌肽滴眼、阿司匹林滴眼及聯(lián)合交替滴眼都明顯的延緩了晶狀體混濁度，聯(lián)合滴眼治療比單獨(dú)使用阿司匹林治療效果好，這種作用與抑制蛋白質(zhì)氧化損傷有關(guān)。
　　本實(shí)驗(yàn)由于實(shí)驗(yàn)環(huán)境的影響，為了保持實(shí)驗(yàn)室的空氣流通，導(dǎo)致室內(nèi)溫度相對(duì)較低，對(duì)于處于糖尿病時(shí)期的大鼠來(lái)說(shuō)，造成了死亡率的增加。本實(shí)驗(yàn)測(cè)定的是巰基化合物的含量，雖然巰基化合物主要是谷胱甘肽和蛋白質(zhì)，但