正常及糖尿病兔后囊膜混濁發(fā)生過程中Kistrin調(diào)控晶狀體上皮細(xì)胞膠原代謝的分子機(jī)制.pdf

1、目的：前期研究已證實(shí)去整合素Kistrin可明顯抑制體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細(xì)胞(Lens epithelium cells，LECs)的增殖、粘附及移行?，F(xiàn)利用兔眼后囊膜混濁(Posterior capsular opacification，PCO)模型，研究在Kistrin的干預(yù)下，正常及糖尿病兔LECs增殖及細(xì)胞間連接的變化，進(jìn)一步研究細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix，ECM)中的Ⅳ型膠原、Ⅳ型膠原的調(diào)控因子基質(zhì)

2、金屬蛋白酶(Matrix metalloproteinases 2，MMP-2)及其抑制因子組織性金屬蛋白酶抑制物(Tissue inhibitor ofmetalloproteinase 2，TIMP-2)基因改變?nèi)咧g的相互關(guān)系以探討其對晶狀體后囊膜中Ⅳ型膠原作用的分子機(jī)制，并進(jìn)一步探討Kistrin對細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)通路中的關(guān)鍵信號因子粘著斑激酶(Focal adhesion kinase，F(xiàn)AK)及其下游因子組織性基質(zhì)金屬蛋白酶

3、(Extracellular signal-regulated kinase，ERK)基因表達(dá)的影響，探討其在LECs中作用的分子途徑，為去整合素Kistrin防治后發(fā)性白內(nèi)障提供有力的理論依據(jù)。
　　 方法：①制備兔眼PCO模型，術(shù)畢時(shí)前房分別注入四種不同濃度(0、40、80、160ng/ml)的Kistrin，術(shù)后在裂隙燈顯微鏡下觀察PCO發(fā)生情況及形態(tài)，于術(shù)后14天及3個(gè)月時(shí)取材，分別檢測LECs增生細(xì)胞核抗原(proli

4、feratingcellnuclearantigen，PCNA)的表達(dá)及對角膜、視網(wǎng)膜的影響，以明確Kistrin的有效濃度及安全性；②建立糖尿病兔模型，后行透明晶狀體摘除術(shù)制成糖尿病兔PCO模型，分為實(shí)驗(yàn)組及對照組，觀察該濃度Kistrin對14天時(shí)正常血糖及糖尿病兔LECs中PCNA、連接素43(connexin43，Cx-43)及正常血糖兔晶狀體后囊膜Ⅳ型膠原的表達(dá)；③分為空白對照組、陰性對照組及實(shí)驗(yàn)組，定量檢測LECs中MMP-

5、2、TIMP-2、FAK、ERK的基因表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：14天及3個(gè)月時(shí)，80ng/ml的Kistrin可明顯抑制LECs的增殖，未見對角膜及視網(wǎng)膜細(xì)胞的毒性損害；正常血糖兔眼在Kistrin干預(yù)后14天及3個(gè)月時(shí)PCNA及Ⅳ型膠原的表達(dá)均明顯減少；14天時(shí)Cx-43的表達(dá)明顯減少；糖尿病兔PCO模型中術(shù)后14天時(shí)，LECs中PCNA、Cx-43的表達(dá)明顯高于正常血糖兔，經(jīng)Kistrin干預(yù)后表達(dá)均明顯降低但PCNA仍高于

6、正常血糖時(shí)；14天時(shí)，正常血糖兔中B組與A組比較，MMP-2mRNA，TIMP-2mRNA的表達(dá)明顯升高(p＜0.05)，F(xiàn)AK和ERK的基因表達(dá)無變化(p＞0.05)，經(jīng)Kistrin干預(yù)后，MMP-2mRNA的表達(dá)明顯降低(p＜0.05)，TIMP-2mRNA的表達(dá)無明顯改變(p＞0.05)，F(xiàn)AK和ERK的基因表達(dá)無變化(p＞0.05)。
　　 結(jié)論：去整合素Kistrin可有效抑制兔眼中PCO的形成，其抑制Ⅳ型膠原表達(dá)的