β-氨基酸對映體的分離、分析和制備.pdf

1、由β-氨基酸構成的擬多肽即β-肽的藥理活性和構效關系的研究是近年來藥物科學領域的熱點問題之一.將β-氨基酸引入多肽結構中,克服了α-肽易被蛋白水解酶降解、口服可獲性低等缺陷,β-肽顯示出抑制代謝的活性、具有更加穩(wěn)定的二級結構且與目標酶和受體顯示更強的親和力.β-肽對映異構體在體內(nèi)可能表現(xiàn)出不同的藥理活性和藥代動力學性質.為了研究單一對映體的藥理行為和代謝途經(jīng),首先必須獲得β-肽的單一對映體.如果合成β-肽的消旋體再進行拆分,β-肽為大分

2、子物質較難拆分；如果對其中間體β-氨基酸進行拆分,由于β-氨基酸為小分子物質且含有酸性和堿性基團,可選擇的分離分析模式多、方法簡便,得到的單一對映體再制備β-肽就較簡單易行.在本論文中我們分別采用毛細管電泳法和高效液相色譜法這兩種高效、簡便、快速且應用最廣泛的拆分手段,對β-氨基酸外消旋體進行了手性拆分并對其拆分機理進行了探討,而且實現(xiàn)了制備,并在此基礎上初步探索了化學法和酶法拆分β-氨基酸.為了快速測定消旋體中的對映體比例,我們首先建

3、立了β-氨基酸的毛細管電泳手性分離分析方法.以酒石酸為原料,經(jīng)過酯化、酰胺化、環(huán)合、脫酰胺保護等步驟合成了手性拆分試劑18-冠-6-四羧酸(18C6H4).基于在低pH時氨基酸對映體以伯胺離子形式與18C6H<,4>形成的兩種非對映體絡合物,在毛細管電泳的條件下,兩者具有不同的遷移時間而得以分離.以手性冠醚為手性添加劑的毛細管電泳法成功地用于五種β-氨基酸對映體的分離,分離因子高達1.08.實驗結果表明,該方法快速、簡便,可以用于非色譜

4、法拆分β-氨基酸的監(jiān)測方法. 發(fā)展了β-氨基酸的高效液相色譜手性分離分析方法.首先在流動相中加入光學純L-α-氨基酸作為手性配體,通過流動相中Cu<'2+>與β-氨基酸的D-和L-型對映體形成兩種非對映體的絡合物平衡常數(shù)的差別,在反相液相色譜系統(tǒng)中可實現(xiàn)β-氨基酸對映體的拆分.該法選擇性高,但系統(tǒng)平衡慢、基線波動大、色譜柱易堵塞.為了克服上述弊端,我們將L-α-氨基酸鍵合于硅膠上,制備了手性配體交換色譜固定相,用于β-氨基酸對映