氨基酸對映體的毛細管電泳-電化學(xué)分離檢測.pdf

1、氨基酸組成蛋白質(zhì)的基本單元，在人體及動物生命活動中起著舉足輕重的作用，自然界存在的及具有生物活性的氨基酸均為L型氨基酸，然而非天然氨基酸多為外消旋體，D型氨基酸在生理活性和實際用途與L型有很大差別，D型必須在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為L型才能被機體吸收利用，因此DL-基酸的分離是生命科學(xué)研究的基礎(chǔ)，在蛋白質(zhì)多肽的研究、有機化學(xué)中的不對稱合成以及醫(yī)藥、食品、衛(wèi)生等領(lǐng)域的研究中都具有重要意義。采用通常的氣相色譜和液相色譜法拆分，制備手性固定相和色譜柱費用昂

2、貴，大多數(shù)氨基酸沒有紫外吸收峰、不產(chǎn)生熒光，一般需要柱前樣品衍生化。衍生化過程不僅費時繁瑣，而且有可能使分析物質(zhì)發(fā)生改變，影響分析結(jié)果。高效毛細管電泳由于其高效、快速、樣品用量少、操作簡單等優(yōu)點，成為生物化學(xué)和分析化學(xué)中最受矚目，發(fā)展最快的一種分離分析新技術(shù)，已被廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)、手性分離和環(huán)境檢測等領(lǐng)域。電化學(xué)檢測作為一種靈敏度高，選擇性好的檢測方法在毛細管電泳分離分析中得到了廣泛的應(yīng)用，電導(dǎo)檢測具有通用性，對于氨基酸無須進行衍生化

3、即可檢測，操作簡單，運行成本低。本論文采用了毛細管電泳－電導(dǎo)檢測分別對異亮氨酸和組氨酸進行了分離檢測，并對其分離機理進行了初步的探討。 本論文包括三個部分，主要內(nèi)容如下： 第一章回顧和評述了毛細管電泳的發(fā)展歷史；詳細介紹了毛細管電泳的基本原理；概述了毛細管電泳檢測的各種方法，特別對電化學(xué)檢測的各種方法及其最新應(yīng)用進展進行了詳細的介紹；重點介紹了氨基酸的分離檢測方法和毛細管電泳在氨基酸的手性分離的應(yīng)用和研究進展；并闡述了本

4、課題的研究背景和意義。 第二章在熔融石英毛細管(50μmi.d.×50cm)中，銅鹽和羥丙基甲基纖維素作為二元協(xié)同手性選擇劑，以2mmol/LNaAC+3mmol/LHAc+1mmol/LCu+10mg/LHPMC(pH=3.5)為電泳運行液，分離電壓15.0kV，建立了異亮氨酸對映體的毛細管電泳分離-電導(dǎo)檢測的分析新方法。異亮氨酸對映體獲得良好的基線分離，其線性范圍為3～500mg/L，檢出限(S/N=3)為1mg/L。對影響

5、分離度的影響因素：電泳運行液組成，手性選擇劑、HPMC濃度等進行了詳細的討論。本方法具有較好檢測靈敏度及重現(xiàn)性，操作簡便，分析成本低，可發(fā)展于實際樣品的分析應(yīng)用。 第三章采用毛細管區(qū)帶電泳-電導(dǎo)法，以銅-L-精氨酸作為配基交換選擇劑，在2mmol/LNaOH+0.4mmol/LCit+1.3mmol/LCu+2.6mmol/LL-Arg(pH=10.2)運行液中，采用電動進樣，進樣電壓9.0kV，進樣時間10s，分離電壓15.0