福氏2a痢疾桿菌hns基因功能的研究.pdf

1、痢疾桿菌在30℃時(shí)不具有侵襲力，37℃時(shí)毒力明顯增強(qiáng)，已有的研究表明這種依賴于溫度的毒力基因的表達(dá)受H-NS蛋白的調(diào)控。H-NS是一種重要的類核相關(guān)蛋白，在革蘭氏陰性菌中普遍存在，能夠調(diào)控大量基因的表達(dá)。對其研究有助于加深人們對痢疾桿菌致病機(jī)理的認(rèn)識，為預(yù)防和控制該病的發(fā)生提供更多的手段和途徑?！　榱烁钊氲牧私鈎ns基因在細(xì)菌生命活動(dòng)中所起的作用，我們首先利用RecA重組系統(tǒng)構(gòu)建了痢疾桿菌2457Thns基因的插入突變體；隨后，對

2、基于Red重組系統(tǒng)的痢疾桿菌2457T缺失突變體的構(gòu)建方法進(jìn)行了摸索并成功地敲除了hns、hdeA、hdeB、yhiE和yhiF5個(gè)基因，研究表明延長同源臂的長度可以明顯提高同源重組的效率，縮短構(gòu)建缺失突變體所需的時(shí)間。對野生株和2457T△hns的生長曲線和侵襲能力進(jìn)行的研究表明：與野生株相比，突變體的生長速度變緩，侵襲Hela細(xì)胞能力減弱。　　利用雙向電泳技術(shù)對2457T和2457T△hns在不同的培養(yǎng)基和生長階段的蛋白表達(dá)譜進(jìn)行

3、了比較，發(fā)現(xiàn)了113個(gè)表達(dá)差異的蛋白點(diǎn)，經(jīng)質(zhì)譜鑒定出的有84個(gè)，對應(yīng)89個(gè)基因。其中47個(gè)基因表達(dá)上調(diào)，42個(gè)基因表達(dá)下調(diào)。這些表達(dá)差異的基因不但與氨基酸合成、中間產(chǎn)物及能量代謝有關(guān)，而且還與痢疾桿菌對環(huán)境變化的適應(yīng)緊密相連，表明H-NS對基因的表達(dá)具有全局性的調(diào)控作用。比較特別的是，6個(gè)參與組氨酸合成與代謝的基因hisJ、hisG、hisF、hisH、hisB以及hisD在突變體表達(dá)下調(diào)，而與鐵代謝有關(guān)的5個(gè)基因fur、ftn、dps