cAMP在豚鼠屈光發(fā)育和近視形成中的作用及其機制.pdf

1、本研究分為兩部分。
　　 第一部分 高度近視易感基因PDE4B在正常豚鼠屈光發(fā)育及形覺剝奪豚鼠近視進展中的作用
　　 目的:本課題組前期GWAS（Genome-wide Association Studies）研究發(fā)現(xiàn)，并在兩個獨立高度近視人群樣本驗證PDE4B基因與高度近視相關(guān)。本研究將應用近視動物模型，研究PDE4B在豚鼠正常屈光發(fā)育以及形覺剝奪性近視（form-deprived myopia，F(xiàn)DM）發(fā)生發(fā)展中的作

2、用及其可能的機制。
　　 方法:將182只豚鼠隨機分為正常組和形覺剝奪組。免疫熒光實驗觀察PDE4B在豚鼠眼部的表達情況。應用放射免疫法檢測形覺剝奪性近視及近視恢復豚鼠視網(wǎng)膜、鞏膜cAMP水平。對正常和形覺剝奪豚鼠行球旁注射PDE4抑制劑rolipram，檢測實驗前后屈光度和眼軸參數(shù)。實驗結(jié)束后在電鏡下觀察豚鼠鞏膜膠原纖維的變化情況。
　　 結(jié)果:PDE4B在豚鼠視網(wǎng)膜和鞏膜均有表達，形覺剝奪性近視眼鞏膜中PDE4B的表

3、達量較對側(cè)眼降低，在PDE4家族的其他成員(PDE4A，C，D)中并沒有觀察到這一現(xiàn)象。形覺剝奪2周后，實驗眼鞏膜中cAMP含量較對側(cè)眼和正常組顯著升高(p=0.004，p=0.027)?；謴?天后，實驗眼鞏膜cAMP水平明顯下降(p=0.024)，與對側(cè)眼相比無顯著差異。實驗眼視網(wǎng)膜中cAMP含量與對側(cè)眼和正常組比較無顯著差異。球旁注射PDE4抑制劑rolipram抑制PDE4B表達，并誘導正常豚鼠實驗眼近視形成(p＜0.001)并伴

4、有玻璃體腔深度及眼軸長度的相應延長。FDM豚鼠實驗眼給予球旁注射rolipram4周后，近視形成量較單純形覺剝奪誘導形成量明顯增加(p＜0.001)，同時玻璃體腔深度和眼軸長度的相應延長。在給予形覺剝奪和rolipram注射的實驗眼中，還觀察到鞏膜膠原纖維直徑變細的現(xiàn)象。
　　 結(jié)論:近視發(fā)生時，鞏膜中PDE4B表達下降，cAMP水平升高。PDE4抑制劑rolipram可以誘導正常豚鼠近視形成，增加形覺剝奪豚鼠近視形成量，并伴有

5、鞏膜膠原纖維直徑變細。PDE4B可能通過cAMP調(diào)控鞏膜膠原合成促進近視的發(fā)展。
　　 第二部分 調(diào)節(jié)cAMP水平對正常豚鼠屈光發(fā)育及形覺剝奪豚鼠近視進展的影響
　　 目的:以局部給予藥物的方法升高或降低眼部cAMP水平，研究cAMP對豚鼠正常屈光發(fā)育以及形覺剝奪性近視發(fā)生發(fā)展的調(diào)控作用。
　　 方法:將186只豚鼠隨機分為正常組和形覺剝奪組。每組均包括以下亞組，即無注射組、溶劑注射組及不同藥物注射組。實驗眼球旁

6、注射溶劑或者cAMP類似物(db-cAMP)/AC激活劑(forskolin)/AC抑制劑(SQ22536)100μl，連續(xù)注射4周，對側(cè)眼不做處理。于實驗前、給藥2周及實驗結(jié)束時檢測屈光度及眼軸參數(shù)的變化。
　　 結(jié)果:注射cAMP類似物（db-cAMP）/AC激活劑(forskolin)升高眼部cAMP水平均能促進正常組豚鼠實驗眼近視的形成(p＜0.001)，并伴有玻璃體腔及眼軸的相應延長，而對形覺剝奪性近視豚鼠的屈光及眼軸

7、參數(shù)沒有明顯的影響;相反，給予AC抑制劑SQ22536降低cAMP水平對正常豚鼠的屈光及眼軸參數(shù)沒有明顯的影響，但卻能在一定程度上抑制形覺剝奪豚鼠近視的發(fā)展和玻璃體腔及眼軸的延長(p＜0.001)。
　　 結(jié)論:球旁注射cAMP類似物db-cAMP/AC激活劑forskolin升高cAMP水平可以誘導正常豚鼠近視形成及玻璃體腔和眼軸延長，但不影響FDM豚鼠近視進展。球旁注射AC抑制劑SQ22536降低cAMP水平可以顯著抑制形覺