Notch信號(hào)在雞卵泡形成和發(fā)育中作用的研究.pdf

1、原始卵泡是卵泡發(fā)育的起始，其數(shù)量的多少也是母雞產(chǎn)蛋量多少的重要前提之一。對(duì)原始卵泡的研究，有助于從源頭上增加產(chǎn)蛋母雞卵泡的數(shù)量，從而可以增加母雞用于產(chǎn)蛋的卵泡庫(kù)。目前對(duì)原始卵泡形成的研究主要集中在哺乳動(dòng)物上，而在鳥類上的研究較少。因此本實(shí)驗(yàn)以海蘭雛雞為研究材料，主要的研究?jī)?nèi)容有如下兩個(gè)方面:①探索出殼后一個(gè)月內(nèi)小母雞卵泡發(fā)育的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律;②明確Notch信號(hào)相關(guān)基因在卵泡形成前后的變化，并進(jìn)一步探究Notch信號(hào)在原始卵泡形成過(guò)程中的

2、作用。
　　1.卵泡發(fā)育動(dòng)態(tài)規(guī)律的觀察
　　本研究以出殼后一個(gè)月內(nèi)海蘭小母雞為研究對(duì)象，旨在探究卵泡在這一時(shí)期的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律。通過(guò)HE染色等方法對(duì)出殼后一個(gè)月內(nèi)小母雞卵巢的形態(tài)學(xué)分析。結(jié)果顯示，原始卵泡形成開始于H4，初級(jí)卵泡第一次出現(xiàn)在H7，次級(jí)卵泡應(yīng)在H21左右形成。通過(guò)卵泡的數(shù)量統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，在出殼后一個(gè)月內(nèi)，與仍然在生殖細(xì)胞簇中的卵母細(xì)胞相比，形成卵泡的卵母細(xì)胞僅占少數(shù)。原始卵泡的數(shù)量在H14左右呈下降趨勢(shì)，在H21又恢

3、復(fù)至H7的水平。初級(jí)卵泡的數(shù)量在H14有明顯的上升趨勢(shì)，在H21的變化不明顯，在H28呈下降趨勢(shì)。次級(jí)卵泡在H21有少量的形成，在H28形成加快。但是在這段時(shí)間內(nèi)，單位面積(100×100μm2)內(nèi)生殖細(xì)胞簇的數(shù)量并無(wú)明顯下降趨勢(shì)。對(duì)單個(gè)生殖細(xì)胞簇中生殖細(xì)胞計(jì)數(shù)發(fā)現(xiàn)，生殖細(xì)胞簇含有的生殖細(xì)胞大多數(shù)在17個(gè)以下。通過(guò)RT-PCR發(fā)現(xiàn)，早期減數(shù)分裂相關(guān)的基因——Stra8、Dmc1、Spo11、Scp3在出殼后一個(gè)月內(nèi)和八月齡的母雞卵巢中均

4、有表達(dá)。這說(shuō)明出殼后的母雞中仍有進(jìn)行減數(shù)分裂的可能。綜上所述，隨著母雞的發(fā)育，除原始卵泡外，各級(jí)卵泡在形成后一周左右有加速發(fā)育的趨勢(shì)，而同時(shí)原始卵泡和初級(jí)卵泡的數(shù)量會(huì)因?yàn)橄乱患?jí)卵泡的形成和發(fā)育而出現(xiàn)一定的下降趨勢(shì)，但之后不久就會(huì)恢復(fù)起初的水平。在這一時(shí)間段內(nèi)，無(wú)論是生殖細(xì)胞簇的數(shù)量，還是生殖細(xì)胞簇中的卵母細(xì)胞的百分比均沒(méi)有明顯的變化。單個(gè)生殖細(xì)胞簇中的生殖細(xì)胞的數(shù)量也無(wú)明顯變化。
　　2.Notch信號(hào)在原始卵泡形成中的作用

5、>　　雌性動(dòng)物在出生前后或出殼后，其卵巢中會(huì)出現(xiàn)一個(gè)重要事件——生殖細(xì)胞簇的破裂和原始卵泡的形成。之前的研究發(fā)現(xiàn)有許多的因子參與這一過(guò)程。Notch信號(hào)是其中作用非常明顯的一種。本研究以雛雞為研究模型，通過(guò)對(duì)其卵巢體外培養(yǎng)等方法，探究Notch信號(hào)在原始卵泡形成和發(fā)育過(guò)程中的作用。結(jié)果顯示，Notch信號(hào)在原始卵泡形成前后表達(dá)變化明顯。Jag2的表達(dá)量在所選的時(shí)間段內(nèi)均呈上升趨勢(shì)(相對(duì)于H0)，其余受體、配體和靶基因隨著發(fā)育階段的不同而

6、呈現(xiàn)不同的變化。在卵巢體外培養(yǎng)體系中加入DAPT(Notch抑制劑)后，通過(guò)形態(tài)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，卵泡的數(shù)量明顯減少，生殖細(xì)胞簇的數(shù)量明顯增多。進(jìn)一步利用RT-PCR和Western Blot分析發(fā)現(xiàn)，PI3K/Akt信號(hào)通路的相關(guān)基因和蛋白亦受到減弱的Notch信號(hào)的抑制，但Pten的表達(dá)呈顯著上升。與Notch信號(hào)相關(guān)的E-cadherin和N-cadherin的表達(dá)都隨著Notch信號(hào)的減弱而呈顯著的下降。Notch信號(hào)的直接下游基因之

7、一c-myc的表達(dá)也因Notch信號(hào)的抑制而下調(diào)。此外，當(dāng)Notch信號(hào)被抑制后，還會(huì)下調(diào)一些如卵泡形成有關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，如Ahr、Nobox等。綜上所述，Notch信號(hào)可能是通過(guò)調(diào)節(jié)PI3K/Akt信號(hào)通路的活性、鈣黏蛋白的表達(dá)以及一些轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)來(lái)影響雞原始卵泡的形成。
　　本研究一方面探索了卵泡發(fā)育的動(dòng)態(tài)規(guī)律，并發(fā)現(xiàn)生殖細(xì)胞簇在出殼后一個(gè)月內(nèi)變化不明顯的現(xiàn)象。另一方面研究了Notch信號(hào)相關(guān)基因在卵巢中表達(dá)變化規(guī)律，并