HBsAg刺激樹突狀細胞后MicroRNA表達譜的變化.pdf

1、目的：以乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)誘導(dǎo)刺激小鼠髓系樹突狀細胞(DC)，利用芯片技術(shù)檢測刺激前后細胞microRNA(mRNA)表達情況，了解HBsAg刺激DC前后miRNA表達譜的變化，為研究miRNA在乙型肝炎病毒感染的免疫機制中的作用提供新線索。
　　 方法：首先，體外利用GM-CSF、IL-4等因子誘導(dǎo)培養(yǎng)未成熟樹突狀細胞，TNF-α誘導(dǎo)成熟，使用優(yōu)化后的實驗條件進行原代DC培養(yǎng)，用倒置顯微鏡、透射電鏡、流式細胞儀

2、等方法鑒定培養(yǎng)出的原代DC。其次，培養(yǎng)所得imDC分為四組：未刺激組(A組)、HBsAg、LPS、TNFα分別刺激組(即BCD組)。用TRIZOL法抽提細胞總RNA，并純化后，利用吸光光度計、Agilent2100生物分析儀等方法鑒定RNA質(zhì)量，確保下一步實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。最后，利用基因芯片技術(shù)，將細胞miRNA與小鼠miRNA芯片雜交，采用圖像軟件等技術(shù)進行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換分析及校正。三個刺激組分別與未刺激組的miRNA表達譜進行比較。篩選出

3、HBsAg刺激組部分差異表達較顯著的miRNA，利用計算機軟件技術(shù)對部分顯著表達的miRNA進行靶基因初步預(yù)測。
　　 結(jié)果：利用改良后的方法可體外培養(yǎng)出純度較高、數(shù)量較大的小鼠髓系DC。HBsAg刺激前后miRNA差異表達2倍以上者共30個，其中16個上調(diào)，14個下調(diào)。三個不同刺激組間miRNA差異譜存在不同差異。篩選出的靶基因中包含DC信號通路的相關(guān)成分。
　　 結(jié)論：發(fā)現(xiàn)HBsAg刺激小鼠髓系DC前后miRNA表達