MicroRNA-27a對小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞成熟及其細(xì)胞因子分泌的影響.pdf

1、目的：研究microRNA-27a(miR-27a)對脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激的小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞(dendritic cell，DC)的成熟及其細(xì)胞因子分泌的影響。
　　方法：小鼠骨髓來源的未成熟樹突狀細(xì)胞（immature dendritic cell，imDC）經(jīng)免疫磁珠提純后，用LPS刺激24小時，流式細(xì)胞術(shù)檢測其表面分子的表達(dá)，驗證LPS誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞成熟的模型的建立。RT-PCR檢

2、測LPS刺激骨髓來源的樹突狀細(xì)胞(bone marrow derived dendritic cell，BMDC)成熟前后miR-27a的表達(dá)情況。小鼠骨髓來源的imDC轉(zhuǎn)染miR-27a的模擬物（miR-27a mimics）、抑制物(miR-27a inhibitors)后，用LPS刺激24小時，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測其表面共刺激分子CD80、CD86及MHCⅡ表達(dá)，ELISA法檢測其上清中的IL-12及IL-10蛋白水平，RT-PCR

3、方法檢測其細(xì)胞內(nèi)IL-12及IL-10 mRNA水平，混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)檢測其刺激T細(xì)胞增殖能力。
　　結(jié)果：純化后的BMDC純度CD11c大于90％（94.8％±4.6％），與未處理組比較，LPS刺激24小時后的DC表面的共刺激分子CD80、CD86及MHCⅡ表達(dá)均顯著增高(P＜0.001);LPS刺激24小時后，與對照組及轉(zhuǎn)染miR-27ainhibitors組比較，轉(zhuǎn)染miR-27a mimics細(xì)胞的共刺激分子CD80、CD