脾臟樹突狀細(xì)胞在MODS病程中遷移變化的研究.pdf

1、目的：觀察小鼠脾臟樹突狀細(xì)胞(dendritic cell，DC)在多器官功能障礙綜合征(Mul-tiple organs dysfunction syndrome，MODS)分布位置的變化，檢測(cè)脾臟DC功能相關(guān)的表面分子和趨化因子受體-7在MODS病程中的變化規(guī)律與意義。探討脾臟13(2在免疫紊亂、過度炎癥反應(yīng)及臟器損傷機(jī)制中的影響與作用，為MODS免疫學(xué)機(jī)制與防治研究提供新的依據(jù)。方法：腹腔注射酵母多糖復(fù)制C57BL/6小鼠MODS

2、模型，實(shí)驗(yàn)分組：(1)正常對(duì)照組(n=15)；(2)MODS組(n=60)：3-6小時(shí)組、24-48小時(shí)組、5-7日組和10-12日組。分別在設(shè)定的時(shí)間點(diǎn)取血和脾臟。脾臟-部分無菌、無酶液氮凍存，另一部分用于做單細(xì)胞懸液。采用免疫組化方法觀察各組小鼠脾臟DC CD11c表達(dá)情況；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)脾臟DC細(xì)胞免疫表型(MtHC-Ⅱ和CD86)、脾臟DC表達(dá)CCR7在MODS病程中的變化、脾臟DC；在MODS病程過程中數(shù)量變化、外周血T細(xì)

3、胞亞群和外周血單核細(xì)胞MHC-Ⅱ分子表達(dá)水平；YUNEL，方法檢測(cè)在MODS病程中脾臟細(xì)胞凋亡現(xiàn)象。結(jié)果：(1)CD11c陽性細(xì)胞在正常小鼠脾臟中主要分布在邊緣區(qū)和濾泡生發(fā)中心，在白髓T細(xì)胞區(qū)和紅髓中DC分布極少；致傷早期(3-6小時(shí))，CD11c陽性細(xì)胞主要分布白髓的T細(xì)胞區(qū)；急性損傷期(12-48小時(shí))，CDllc陽性細(xì)胞此時(shí)主要分布在脾臟白髓；緩解期(5-7天)，CD11c陽性細(xì)胞分布較為彌散；MODS期(10-12天)，CD11

4、c陽性細(xì)胞又以脾臟邊緣區(qū)附近分布為主。(2)脾臟DC的數(shù)量在致傷后3-6小時(shí)組急劇增加，24-48小時(shí)組明顯下降，5-7天和10-12天組與正常小鼠脾臟DC數(shù)量相當(dāng)。(3)在24-48小時(shí)組和10-12天組脾臟存在大量凋亡細(xì)胞(4)脾臟DC表達(dá)MHC-Ⅱ、CD86、CCR7在3-6小時(shí)和12-48小時(shí)顯著增加，10-12天組MHC-Ⅱ、CD86、CCR7表達(dá)水平明顯下降。(5)酵母多糖致傷后3-6小時(shí)組，外周血單核細(xì)胞MHC-Ⅱ分子和C

5、D4+T細(xì)胞含量下降而CD8+T細(xì)胞含量增加，CD4+/CD8+比值降低；致傷后24-48小時(shí)組，外周血單核細(xì)胞MHC-Ⅱ分子和CD4+T細(xì)胞繼續(xù)呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，降至最低點(diǎn)，CD8+T細(xì)胞含量也減少，CIM+/CD8+比值降低；致傷后5-7天組，外周血單核細(xì)胞MHC-Ⅱ分子有所恢復(fù)，CIM+T細(xì)胞增加，CD4+/CD8+比值回升，但仍低于正常組；致傷后10-12天組，外周血單核細(xì)胞MHC-Ⅱ分子和CD4+T細(xì)胞數(shù)目再度明顯減少。而CD8+

6、T細(xì)胞數(shù)目明顯增高，CD4+/CD8+比值倒置，較正常組明顯下降。結(jié)論：1、脾臟DC在MODS病程早期由脾臟邊緣區(qū)向白髓發(fā)生遷移，并在遷移過程中不斷快速成熟，導(dǎo)致了機(jī)體失控性炎癥反應(yīng)；晚期DC以不成熟狀態(tài)滯留在邊緣區(qū)附近，此時(shí)機(jī)體處于免疫抑制狀態(tài)。2、CCR7可能是影響MODS小鼠脾臟樹突狀細(xì)胞遷移活性和免疫功能的一個(gè)重要因素。MODS病程中脾臟DC CCR7表達(dá)水平可以作為評(píng)估其遷移活性和小鼠機(jī)體細(xì)胞免疫應(yīng)答水平的一個(gè)指標(biāo)，CCR7表