溫氏附紅細(xì)胞體抗原特性及16S rRNA基因系統(tǒng)進(jìn)化分析研究.pdf

1、牛附紅細(xì)胞體病是由溫氏附紅細(xì)胞體(E.wenyoni)引起的一種傳染病。長期以來，由于該病多呈隱性感染，發(fā)病率較低，未引起人們的足夠重視。近年來研究發(fā)現(xiàn)，該病的發(fā)病率呈上升趨勢，成為影響?zhàn)B牛業(yè)發(fā)展的主要疾病之一。同時，國內(nèi)外對溫氏附紅細(xì)胞體的研究相對較少，有關(guān)形態(tài)學(xué)特性、分類地位、診斷準(zhǔn)確性、有效預(yù)防等問題都亟待進(jìn)一步研究。本試驗(yàn)采用自然感染E.wenyoni的牛血為試驗(yàn)材料，對E.wenyoni的抗原特性及其16SrRNA基因特點(diǎn)進(jìn)行

2、了研究：首先，研究了E.wenyoni的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)、運(yùn)動性及其對牛血液學(xué)指標(biāo)及免疫指標(biāo)的影響，旨在探索E.wenyoni的致病機(jī)理，并為確診牛附紅細(xì)胞體病提供理論與實(shí)踐依據(jù)；其次，從自然感染牛血液中純化附紅細(xì)胞體，應(yīng)用SDS-PAGE和免疫印跡試驗(yàn)對E.wenyoni抗原蛋白組分進(jìn)行了初步分析，為制備特異性診斷抗原、提高血清學(xué)診斷的特異性和準(zhǔn)確性以及研制高效附紅細(xì)胞體疫苗奠定基礎(chǔ)；最后，對E.wenyoni16SrRNA基因進(jìn)行了擴(kuò)增，

3、對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行克隆和測序，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹并進(jìn)行分析，目的在于從系統(tǒng)進(jìn)化角度探討E.wenyoni的分類學(xué)地位。 顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，被感染的紅細(xì)胞變形，E.wenyoni呈多形性，具有折光性，游離于血漿中的E.wenyoni具有運(yùn)動性，附著于紅細(xì)胞上后，似乎停止運(yùn)動，但實(shí)際上能使紅細(xì)胞發(fā)生震顫；血液學(xué)指標(biāo)測定結(jié)果表明：隨著感染強(qiáng)度的增加，牛血液中紅細(xì)胞數(shù)(RBC)、血紅蛋白含量(HGB)和紅細(xì)胞比容(HCT)均降低，而白細(xì)胞數(shù)(WB

4、C)、紅細(xì)胞滲透脆性和紅細(xì)胞沉降率(ESR)卻增加；免疫指標(biāo)測定結(jié)果顯示：高強(qiáng)度感染牛的紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)(C3bRR)率、紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)(ICR)率以及血液中ANAE+T淋巴細(xì)胞百分率均降低，這表明牛嚴(yán)重感染后，紅細(xì)胞免疫及細(xì)胞免疫處于低下狀態(tài)。 SDS-PAGE結(jié)果顯示，E.wenyoni全蛋白分子量范圍為24kD～150kD，主要的9種蛋白質(zhì)分子量分別為141.34kD，107.27kD，86.03kD，68.05

5、kD，56.21kD，44.30kD，32.99kD，28.89kD，24.59kD。應(yīng)用免疫印跡試驗(yàn)篩選出了3種特異性蛋白質(zhì)，分子量分別為147.31kD，49.03kD，35.72kD。 克隆了E.wenyoni16SrRNA部分基因，測序結(jié)果顯示：所測序列與GenBank發(fā)表的E.wenyoni16SrRNA基因序列(AF016546)相似性最高，達(dá)97.9﹪。系統(tǒng)發(fā)育分析表明，所測序列與支原體屬病原代表種的序列接近，同源