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1、目的:探討聯(lián)合應(yīng)用三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)與紫杉醇(paclitaxel,PTX)誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸癌CT26細(xì)胞凋亡的作用及其機(jī)制,研究對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖、凋亡、細(xì)胞周期以及相關(guān)蛋白表達(dá)的影響,為結(jié)腸癌化學(xué)治療提供理論依據(jù),從而為臨床上結(jié)腸癌的治療提供新的思路及方法。
方法:體外培養(yǎng)結(jié)腸癌細(xì)胞(CT26),按比例稀釋As2O3以及PTX,使As2O3終濃度為0、1.0、2.0、4.0、8.0μmol
2、/L,使PTX終濃度為0、0.1、0.2、0.4及0.8μmol/L,處理CT26細(xì)胞72h后,以MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖率,選擇30%左右抑制濃度的As2O3與不同濃度的紫杉醇聯(lián)合處理細(xì)胞,MTT法檢測(cè)細(xì)胞增值率,以抑制增殖效果最為明顯的劑量組進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn);用倒置相差顯微鏡觀(guān)察在不同濃度和不同時(shí)間作用下,細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期CT26細(xì)胞接種于6孔板培養(yǎng)24h,分別以對(duì)照、2μmol/LAs2O3、0.04μmol/LPTX以及2μ
3、mol/LAs2O3+0.04μmol/LPTX處理細(xì)胞72h,以流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)藥物處理后各組細(xì)胞周期及凋亡率;分別收集對(duì)照,2μmol/LAs2O3、0.04μmol/LPTX以及2μmol/LAs2O3+0.04μmol/LPTX處理細(xì)胞72h后的細(xì)胞,采用WesternBlot法檢測(cè)藥物處理后,細(xì)胞中Bax,Blc-2以及PARP的表達(dá)情況。
結(jié)果:分別以不同濃度的As2O3處理小鼠結(jié)腸癌CT26細(xì)胞72h,以MTT
4、法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,不同濃度的As2O3均能夠抑制CT26細(xì)胞增殖,呈劑量效應(yīng)關(guān)系;以2.0μmol/LAs2O3分別與不同濃度的PTX聯(lián)合處理CT26細(xì)胞72h,結(jié)果發(fā)現(xiàn),2.0μmol/LAs2O3能夠與不同濃度PTX聯(lián)合抑制細(xì)胞增殖,用factorialanalysis分析兩藥聯(lián)用的性質(zhì),結(jié)果顯示兩藥具有交互作用(P<0.05),其中,2μmol/LAs2O3與0.04μmol/LPTX聯(lián)合效果最佳,其機(jī)制可能是二藥聯(lián)用抑制或阻斷
5、了細(xì)胞增殖和生存相關(guān)因素的作用,從而協(xié)同影響了CT26細(xì)胞增殖及存活。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示:1.As2O3單藥作用可使細(xì)胞周期阻滯于G1期,與對(duì)照組相比增加了33.08%。PTX單藥要使細(xì)胞阻滯于G2/M期(40.22±3.71%,對(duì)照組4.45±1.82%)。聯(lián)合用藥后,S期明顯下降至17.88%(對(duì)照組60.20±3.85%),細(xì)胞主要阻滯于G1期和G2/M期。2.2μmol/LAs2O3與0.04μmol/LPTX聯(lián)合處理能夠協(xié)
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