應(yīng)用堿性成纖維細(xì)胞生長因子基因治療促進(jìn)大鼠早期斷蒂皮瓣成活的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的探討腺病毒介導(dǎo)的堿性成纖維細(xì)胞生長因子基因(Ad-bFGF)對大鼠隨意皮瓣早期斷蒂的影響。方法SD雄性大鼠，普通級，隨機(jī)分成三組：重組復(fù)制缺陷型腺病毒攜帶堿性成纖維細(xì)胞生長因子基因組(Ad-bFGF目的組)、重組復(fù)制缺陷型腺病毒攜帶綠色熒光蛋白組(Ad．GFP對照組)、磷酸鹽緩沖液組(PBS對照組)，每組10只。用3％的戊巴比妥鈉(30μg/g)腹腔注射麻醉后，俯臥固定，8％硫化鈉脫毛，在大鼠背部設(shè)計2cm×6cm隨意皮瓣，蒂位于髂

2、棘連線水平。皮瓣在背部肌膜淺面掀起，包括皮膚、皮下肉膜層和淺筋膜層。皮瓣掀起后即刻用1ml注射器抽取用PBS稀釋的Ad-bFGF溶液或Ad—GFP溶液或直接PBS溶液1ml，從筋膜面向肉膜層和真皮內(nèi)注射，分別距蒂部2cm、4cm及遠(yuǎn)端邊緣均勻10點(diǎn)注射。隨機(jī)選取10只大鼠注射Ad七FGF，10只注射Ad．GFP，10只注射PBS。完成給藥后即刻3．O絲線原位縫合，繼續(xù)單籠飼養(yǎng)、觀察大鼠生活情況及皮瓣成活情況。術(shù)后4d再次麻醉后斷蒂，沿著

3、皮瓣蒂部切開達(dá)淺筋膜層，不掀起皮瓣，原位縫合，繼續(xù)回籠飼養(yǎng)、觀察。斷蒂后7d，將大鼠再次麻醉，用透明硫酸紙復(fù)錄皮瓣大小并涂黑壞死區(qū)域，用數(shù)碼相機(jī)攝像后輸入計算機(jī)，以Metamorph軟件進(jìn)行分析，計算皮瓣成活率。切取皮瓣最遠(yuǎn)端成活組織約1cm×1cm(包括皮膚、皮下肉膜層及部分肌膜)，10％中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，4μmm連續(xù)切片，HE染色，光鏡下觀察組織學(xué)變化。免疫組化分析bFGF的表達(dá)，用鼠抗人bFGF單克隆抗體為一抗，采用

4、SP免疫組化法，棕黃色為陽性染色，根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)及著色深淺進(jìn)行結(jié)果判斷：弱陽性(+)；中度陽性(H-)；強(qiáng)陽性(+++)。微血管計數(shù)，用鼠抗人CD34單克隆抗體為一抗，進(jìn)行血管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記，在400倍光鏡下觀察切片，隨機(jī)選取10個視野進(jìn)行血管斷面計數(shù)。結(jié)果斷蒂后7d，所有實(shí)驗(yàn)動物全部成活。斷蒂前各組皮瓣均未壞死，斷蒂后目的組皮瓣基本成活，對照組皮瓣遠(yuǎn)端均出現(xiàn)壞死。皮瓣的平均成活率，目的組(97．70±2．47)％，Ad．GFP對照組(7

5、832±2．22)％，PBS對照組(79．21±2．29)％。目的組和兩個對照組之間有非常顯著差異性(P<0．01)，Ad．GFP組和PBS組之間無顯著差異性(P＞0．05)。皮瓣組織學(xué)變化，目的組皮瓣中可見大量肉芽組織增生，微血管豐富，而對照組較少。免疫組化分析發(fā)現(xiàn)目的組皮瓣中有大量bFGF沉積，對照組較少(P<0．05)，而Ad．GFP組和PBS組之間差異無顯著性(P>0．05)。微血管斷面密度，目的組(27．32±4．30)／HP