二烯丙基二硫誘導人白血病細胞分化的蛋白質(zhì)組研究.pdf

1、南華大學碩士學位論文二烯丙基二硫誘導人白血病細胞分化的蛋白質(zhì)組研究姓名：何潔申請學位級別：碩士專業(yè)：病理學與病理生理學指導教師：蘇琦20040501何螭南華人學I詞等學力人員碩f：學位論文二烯丙基二硫誘導人白血病細胞分化的差異蛋白質(zhì)組研究研究生：何潔導師：蘇琦教授中文摘要目的研究二烯丙基二硫(DADS)誘導人髓性白血病HL60細胞分化過程中差異表達的蛋白質(zhì)，繪制蛋白質(zhì)差異表達圖譜，鑒定誘導分化有關(guān)蛋白，尋找相關(guān)生物標記物，探討誘導分化的

2、分子機理。方法形態(tài)學觀察和硝基四氮噸藍(NBT)還原反應鑒定DADS誘導HL60細胞分化；固相pH梯度(pH310)等電聚焦和125％SDS聚丙烯酰胺凝膠雙向電泳分離細胞總蛋白質(zhì)；銀染和考馬斯亮藍染色對凝膠上的蛋白質(zhì)進行可視化檢測；運用計算機輔助圖像分析軟件(PDQUEST)進行銀染的蛋白表達圖譜分析：切割差異表達的蛋白質(zhì)點，膠上原位酶解，通過基質(zhì)輔助激光解吸附電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI—TOF—MS)或毛細管高效液相色譜一電噴霧～四

3、極飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜(CapLC—QTOFMS)分析，并采用生物信息學方法搜索NCBInr、EMBL、SWISSPROT等數(shù)據(jù)庫，進行蛋白質(zhì)鑒定。結(jié)果DADS誘導HL60細胞分化后，形態(tài)發(fā)生明顯變化，NBT還原能力明顯增強。雙向電泳分離對照組和處理組分別得到373(匹配率94％)、369(匹配率89％)個點。其中161個匹配的蛋白質(zhì)點存在表達量上的差異；與對照組比較，DADS處理組中29個點表達上調(diào)，132個點表達下調(diào)。通過質(zhì)譜分析和數(shù)據(jù)

4、庫搜索鑒定了其中的18個蛋白質(zhì)點。其中g(shù)alectin10，異質(zhì)核核糖核蛋白DO，網(wǎng)格蛋白1和電子轉(zhuǎn)移黃素蛋白a亞基表達明顯上調(diào)，而增殖細胞核抗原、蛋白酶體‘鏈、RNA結(jié)合蛋白調(diào)節(jié)亞基DJ1蛋白、LyGDI、Cofilin1、鈣網(wǎng)硬蛋白前體、碳酸酐酶II、醛縮酶A、磷酸丙糖異構(gòu)酶、3一磷酸甘油醛脫氫酶、Peroxiredoxinl、Peroxiredoxin3、鋅指蛋白93、腺苷酸激酶同工酶2則表達下調(diào)。這些蛋白功能分別與DNA復制、蛋