二烯丙基二硫作用于人白血病K562細(xì)胞后凋亡相關(guān)基因的差異表達(dá).pdf

1、目的：
　　研究二烯丙基二硫（Diallyl disulfide，DADS）作用于K562細(xì)胞后凋亡相關(guān)基因的差異表達(dá)，為進(jìn)一步探討DADS誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制提供基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.采用瑞士-吉姆薩染色和Hoechst33342染色觀察40 mg/LDADS作用K562細(xì)胞后不同時(shí)間（24h、48h、72h）段的細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。
　　2.運(yùn)用基因芯片技術(shù)檢測(cè)40 mg/LDADS作用K562細(xì)

2、胞24h后凋亡相關(guān)基因的差異表達(dá)。
　　3. RT-PCR法檢測(cè)GADD45A和HO-1基因的mRNA表達(dá)變化，驗(yàn)證基因芯片結(jié)果的可靠性。
　　結(jié)果：
　　1.瑞士-吉姆薩染色觀察到40 mg/L DADS作用K562細(xì)胞后具有典型的凋亡形態(tài)變化：細(xì)胞體積縮小，形態(tài)不規(guī)則，核/漿比例降低，甚至有“出芽”的現(xiàn)象。
　　2. Hoechst33342染色觀察到40 mg/L DADS作用K562細(xì)胞后具有典型的凋亡形

3、態(tài)變化：細(xì)胞核縮小，染色質(zhì)濃縮、可見碎片，甚至有凋亡小體形成。
　　3.40 mg/L DADS作用K562細(xì)胞24h后共有369個(gè)差異表達(dá)基因，其中與凋亡相關(guān)的差異表達(dá)基因共有14個(gè)：上調(diào)的5個(gè)是GADD45A、HSPA1B、PACAP、AEN、TPT1，下調(diào)的9個(gè)是CDKN2D、NFKBIA、IL7、PPP1R13L、GCLM、DDLT4、HO-1、BNIP3L、BNIP3。
　　4. RT-PCR技術(shù)檢測(cè)GADD45A

4、和HO-1基因mRNA表達(dá)情況：40 mg/L DADS 作用K562細(xì)胞24小時(shí)后，GADD45A基因表達(dá)較對(duì)照組上調(diào)，而HO-1基因表達(dá)下調(diào)，這與基因芯片結(jié)果一致。
　　結(jié)論：
　　1.運(yùn)用基因芯片技術(shù)，檢測(cè)了二烯丙基二硫作用后K562細(xì)胞的基因表達(dá)譜變化，發(fā)現(xiàn)有14個(gè)凋亡相關(guān)差異表達(dá)基因，證明DADS誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡是多個(gè)基因共同作用的結(jié)果。
　　2. DADS誘導(dǎo)K562細(xì)胞的凋亡可能受GADD4