Slit-,2--siRNA玻璃體腔注射對急慢性高眼壓大鼠模型視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：建立穩(wěn)定的SD大鼠的急性和慢性青光眼模型，檢測大鼠視網(wǎng)膜上BDNF和slit2mRNA的表達(dá)以及RGC凋亡的狀況，利用RNAi干擾技術(shù)下調(diào)slit2mRNA的表達(dá)，以期通過上調(diào)BDNF的途徑降低RGC的凋亡達(dá)到視神經(jīng)保護(hù)的目的。
　　 方法：①采用大鼠眼前房灌注生理鹽水和不同大鼠視神經(jīng)夾持時間來選擇前房穩(wěn)定的急性高眼壓大鼠模型作為視神經(jīng)保護(hù)的研究；②鞏膜表面血管結(jié)扎聯(lián)合角鞏緣血管網(wǎng)電凝制作慢性高眼壓大鼠模型；③造模成功后摘

2、除眼球，固定包埋后切成5-μm的視網(wǎng)膜切片。免疫組織化學(xué)SP法檢測大鼠視網(wǎng)膜上的BDNF的表達(dá)和核酸分子原位雜交法檢測slit2mRNA在大鼠視網(wǎng)膜上的表達(dá)；④slit2SiRNA模型鼠的右眼玻璃體腔內(nèi)，取大鼠眼球固定切片進(jìn)行BDNF的免疫組化檢查、TUNEL檢查RGC的凋亡以及核酸分子原位雜交檢測slit2mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果：①選用模型是選用20秒(s)的大鼠視神經(jīng)夾持模型作為視神經(jīng)保護(hù)研究的模型，不僅可以達(dá)到生理鹽

3、水前房灌注的急性高眼壓模型的：RGC：凋亡水平，而且保持了眼球的完整性；②鞏膜表面血管結(jié)扎聯(lián)合角鞏緣血管網(wǎng)電凝可以制作穩(wěn)定的大鼠慢性高眼壓模型。③BDNF的免疫染色見于節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)網(wǎng)層、內(nèi)核層和視錐視桿層，其中視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞層(GCL)可見大量胞漿深染的BDNF陽性細(xì)胞。Slit2mRNA在視網(wǎng)膜RG(：層和內(nèi)核層均有表達(dá)，在急性和慢性高眼壓模型的視網(wǎng)膜RG(：層上的表達(dá)是上調(diào)的；④急性高眼壓模型中和慢性高眼壓模型中運用各濃度的slit：