油桐尺蠖核型多角體病毒(BusuNPV)分離株比較及微量檢測(cè)方法的研究.pdf

1、本論文對(duì)油桐尺蠖核型多角體病毒（Buzura suppressatia nucleopolydrovirus，BusuNPV）的不同毒株分別通過生物測(cè)定，了解不同毒株的毒力大??；制作超薄切片，在掃描電鏡下觀察不同毒株的外部形態(tài)特征，在透射電鏡下觀察其病毒粒子的分布狀況；病毒基因組酶切分析病毒核酸的變化。根據(jù)油桐尺蠖核型多角體病毒（BusuNPV）的多角體囊膜蛋白基因(pep)、lef-2基因設(shè)計(jì)特異性引物，成功建立了BusuNPV的PC

2、R檢測(cè)技術(shù)體系。研究內(nèi)容與結(jié)果如下：
　?。?）對(duì)BusuNPV各分離株進(jìn)行毒力測(cè)定，未見明顯差別。LF、SF、WF的LC50分別為4.39×104、6.65×104、1.02×105PIB/ml；LT50分別為5.59、5.69、5.17d。觀察掃描電鏡、透射電鏡照片，發(fā)現(xiàn)各分離株均為單粒包埋核型多角體病毒，多角體直徑為0.85-1.50um，病毒粒子大小為0.195-0.246 um×0.054-0.072 um，各毒株間未見

3、顯著差別。
　?。?）選擇5種常見內(nèi)切酶對(duì)BusuNPV全基因組序列進(jìn)行酶解，除EcoRⅠ外其它內(nèi)切酶酶解條帶均較少，分子量大，不易進(jìn)行分離株比較。其中EcoRⅠ消化的DNA片段約為12條，分子量小于15kb，分離株之間未見差別。雙酶酶解BusuNPV全基因組序列時(shí)，DNA充分被消化，條帶較多，適宜分離株之間比較。但是觀察雙酶切圖譜，各分離株的酶切條帶數(shù)目、大小不存在差別。
　　（3）通過基因比對(duì)，分別確定了BusuNPV的

4、兩個(gè)特異性片段pep基因和lef-2基因，并根據(jù)兩段基因設(shè)計(jì)出兩對(duì)特異性引物BPF、BLA，建立以PCR技術(shù)為基礎(chǔ)的快速檢測(cè)BusuNPV的方法。
　?。?）建立的BusuNPV的PCR檢測(cè)技術(shù)，不僅能短時(shí)間內(nèi)成功的從卵和蛹內(nèi)檢測(cè)到BusuNPV，而且其靈敏度可達(dá)到1 fg·ml-1DNA。經(jīng)過模板多樣性研究，用多角體懸液也可直接作為模板進(jìn)行PCR試驗(yàn)檢測(cè)BusuNPV。
　?。?）本實(shí)驗(yàn)所建立的BusuNPV PCR快速檢