家蠶核型多角體病毒BmNPV orf59基因的功能研究.pdf

1、桿狀病毒（Baculovirus）是目前已知昆蟲病毒中類群最大且最有實用價值的病毒之一。桿狀病毒是一類專一性感染節(jié)肢動物病毒，在感染周期中有兩種表型不同但基因型完全一致的病毒形態(tài)，即出芽型病毒（Budded virus，BV）和包涵體衍生型病毒（Occlusion-derived virus，ODV），桿狀病毒基因組大小在80~180Kb之間。其中家蠶核型多角體病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,Bm

2、NPV)大部分基因的功能在之前已被研究報道，但還有一些基因的功能是未知的。本文以BmNPV orf59（Bm59）為研究對象，研究該基因對BmNPV復制、轉錄、表達及組裝的影響。Bm59是家蠶核型多角體病毒的核心基因之一，但在病毒生活周期過程中的作用尚未可知。本實驗利用λRed重組技術和Bac-to-Bac系統(tǒng)構建野生型重組病毒wtBacmid-polh-egfp、缺失型重組病毒Bm59ko-Bacmid-polh-egfp以及補回型重

3、組病毒Bm59re-Bacmid-polh-egfp，并將3種重組病毒分別轉染家蠶細胞BmN。病毒滴度測定結果表明3種重組病毒都能產生有活力的子代病毒并使細胞感染發(fā)病，但Bm59ko-Bacmid-polh-egfp在各個時相的滴度值顯著低于其他兩種重組病毒（P<0.05），表明Bm59的缺失不能使桿狀病毒徹底失去感染能力，但降低桿狀病毒的增殖水平和感染能力。電鏡分析結果發(fā)現(xiàn) Bm59ko-Bacmid-polh-egfp感染的細胞中只

4、有少量細長的桿狀結構，而其他兩種重組病毒感染細胞后能夠產生大量具有囊膜包裹的成熟病毒粒子，說明Bm59的缺失干擾病毒的增殖和包裝。Q-PCR實驗結果顯示Bm59缺失型重組病毒基因組的復制能力顯著低于其他兩種重組病毒（P<0.05），qRT-PCR結果顯示Bm59缺失型重組病毒早期基因lef-3、晚期基因vp39和極晚期基因p10的轉錄水平均顯著低于其他兩種重組病毒（P<0.05）。為研究 Bm59基因的表達時相，構建了Bm59的原核表達