槲皮素對(duì)系膜細(xì)胞增殖、凋亡作用及其對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)、MCP-1分泌影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本研究通過觀察槲皮素(quercetin)對(duì)系膜細(xì)胞(MC)增殖、凋亡作用及其對(duì)Ang II誘導(dǎo)下細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)和LPS誘導(dǎo)下單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)分泌的影響，探討槲皮素對(duì)腎小球硬化的治療作用，為進(jìn)一步的研究打下實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法：體外培養(yǎng)大鼠系膜細(xì)胞株(HBZY-1)，采用不同濃度的槲皮素和相應(yīng)干預(yù)因素作用，采用四甲基偶氮鹽滲入法(MTT法)檢測(cè)細(xì)胞增殖；采用流式細(xì)胞儀法檢測(cè)細(xì)胞周期及凋亡；采用酶連免疫吸

2、附法(ELISA)測(cè)量血管緊張素II(Ang II)誘導(dǎo)下纖維連接蛋白(FN)、IV型膠原(Col IV)以及LPS誘導(dǎo)下單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)在培養(yǎng)上清中的含量；采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)Ang II誘導(dǎo)下轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)在系膜細(xì)胞的表達(dá)情況。 結(jié)果： l.槲皮素對(duì)MC增殖的影響 在5-20umol／L濃度范圍內(nèi)，槲皮素能夠時(shí)間、劑量依賴性地抑制系膜細(xì)胞的增殖。各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間；各

3、實(shí)驗(yàn)組之間差異均有顯著意義(P<0.05)。 2．槲皮素對(duì)MC細(xì)胞周期的影響 各實(shí)驗(yàn)組隨槲皮素濃度的增加，Go／Gl期細(xì)胞比逐漸增多，而S期細(xì)胞比逐漸下降，各組之間差異有顯著意義(P<0.05)。表明槲皮素可明顯抑制MC增殖，阻止細(xì)胞由Go／G1期進(jìn)入S期。 3．槲皮素對(duì)MC凋亡的影響。 系膜細(xì)胞經(jīng)槲皮素處理24h后，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡，結(jié)果對(duì)照組未出現(xiàn)明顯亞二倍體凋亡峰，槲皮素不同濃度各組均出

4、現(xiàn)亞二倍體凋亡峰。各組凋亡指數(shù)(％)與對(duì)照組相比，各組凋亡指數(shù)之間相比，差異均有顯著性意義(P<0.05)。 4．槲皮素對(duì)AngⅡ誘導(dǎo)下的MC纖維連接蛋白(FN)、Ⅳ型膠原(ColIV) 等分泌的影響。 對(duì)照組相比，AngⅡ明顯上調(diào)MC培養(yǎng)上清中的纖維連接蛋白(FN)、Ⅳ型膠原(ColⅣ)的分泌；而不同濃度的槲皮素對(duì)Ang Ⅱ誘導(dǎo)下的MC培養(yǎng)上清中的FN、ColⅣ的分泌與對(duì)照組相比明顯降低，。槲皮素濃度越高，F(xiàn)N和Co

5、lⅣ分泌越少，各組之間差異具有顯著意義(P<0.05)。 5．槲皮素對(duì)Ang Ⅱ誘導(dǎo)下的MC的TGF-β l表達(dá)的影響。 Ang Ⅱ誘導(dǎo)下的MC的TGF-β l表達(dá)明顯高于對(duì)照組；不同濃度的槲皮素對(duì)AngⅡ誘導(dǎo)下的MC的TGF-β 1表達(dá)與對(duì)照組相比明顯降低；各組之間，槲皮素濃度越高，TGF-β 1表達(dá)越低，各組之間差異具有顯著意義(P<0.05)。 6．槲皮素對(duì)LPS誘導(dǎo)下的MC的MCP-1分泌的影響。

6、 與對(duì)照組相比，LPS誘導(dǎo)下的MC的MCP-1分泌明顯增高；加入槲皮素能劑量依賴性地下調(diào)LPS誘導(dǎo)下的MC的MCP-1的分泌，各組之間差異有顯著意義(P<0.05)。 結(jié)論：(1)槲皮素可顯著抑制系膜細(xì)胞增殖，使系膜細(xì)胞阻滯于GO-G1期；且在較高濃度有誘導(dǎo)系膜細(xì)胞凋亡的作用；(2)槲皮素能劑量依賴性地減少系膜細(xì)胞在Ang Ⅱ誘導(dǎo)下的細(xì)胞外基質(zhì)的分泌，其機(jī)制與其下調(diào)TGF-βl表達(dá)有關(guān)；(3)槲皮素尚能劑量依賴性地下調(diào)LPS誘導(dǎo)