胃泌素抑制胃癌細(xì)胞增殖機(jī)制的研究.pdf

1、胃癌患者常出現(xiàn)胃酸分泌減少，而長期的胃酸缺乏可能導(dǎo)致胃癌的發(fā)生。胃泌素是由胃腸道G細(xì)胞分泌的多肽激素，具有刺激胃酸分泌和營養(yǎng)胃腸粘膜的作用。近年的研究表明，胃泌素影響胃腸腫瘤細(xì)胞的增殖，但結(jié)果存在很大爭議。陰離子交換蛋白2(AE2)是非Na+依賴的CI/HC03交換體，能調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)外陰離子平衡并保證細(xì)胞內(nèi)最適pH。AE2在胃組織中表達(dá)豐富，與胃酸分泌過程中CI的供給緊密相關(guān)，其功能的異常將導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)pH改變和胃酸缺乏。胃泌素與AE2均與

2、胃酸分泌關(guān)系密切，本課題探討了胃泌素對胃癌細(xì)胞中AE2表達(dá)的調(diào)節(jié)及其在抑制胃癌細(xì)胞增殖中的作用。
　　 小鼠胃酸分泌實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示，對于胃泌素(G-17)促進(jìn)胃酸分泌來說，AE2是不可或缺的，在給予外源性胃泌素后，細(xì)胞內(nèi)的AE2表達(dá)上調(diào)。將不同濃度胃泌素作用于胃癌SGC7901細(xì)胞，并分別用胃泌素受體siRNA和受體拮抗劑阻斷胃泌素與受體的結(jié)合，免疫印記和RT-PCR等方法的檢測結(jié)果顯示胃泌素能上調(diào)胃癌細(xì)胞內(nèi)AE2的表達(dá)，呈濃度

3、和時(shí)間依賴性，并需要通過胃泌素受體的介導(dǎo)。
　　 熒光素酶實(shí)驗(yàn)證明，胃泌素作用于AE2啟動(dòng)子的區(qū)域大約定位在-769~199bp之間，并且該區(qū)域中轉(zhuǎn)錄因子早期生長反應(yīng)因子l(Egrl)的結(jié)合位點(diǎn)對于AE2啟動(dòng)子的活性發(fā)揮了非常重要的作用。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，胃泌素能上調(diào)胃癌SGC7901細(xì)胞內(nèi)Egrl的表達(dá)，EMSA實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了胃泌素能促進(jìn)Egrl和AE2啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合，免疫組化的結(jié)果顯示88.9％的高分化胃癌中，出現(xiàn)了Egrl和

4、AE2的陽性表達(dá)一致性。因此，胃泌素主要通過促進(jìn)Egrl的表達(dá)和結(jié)合活性，上調(diào)AE2的表達(dá)。
　　 體外MTT和免疫熒光等實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，胃泌素能抑制SGC7901細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡，而采用AE家族蛋白抑制劑DIDS抑制AE2的功能后，胃泌素抑制胃癌細(xì)胞增殖的效應(yīng)消失。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，系統(tǒng)性高胃泌素血癥能使裸鼠腫瘤細(xì)胞內(nèi)AE2的表達(dá)增加，并顯著抑制裸鼠胃癌種植瘤的生長，這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明胃泌素通過上調(diào)AE2的表達(dá)，從而抑制胃癌細(xì)胞