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文檔簡介
1、目的:脂氧合酶對腫瘤的作用已成為腫瘤研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一,本研究旨在研究15-LOX-1基因抑制人胃癌細(xì)胞AGS增殖,誘導(dǎo)其凋亡的作用機(jī)制。
方法:通過脂質(zhì)體介導(dǎo)瞬時轉(zhuǎn)染15-LOX-1基因于胃癌細(xì)胞AGS中,以轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒PCDNA3.1的AGS細(xì)胞及未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的AGS細(xì)胞為對照,RT-PCR法檢測15-LOX-1和PPARγ mRNA表達(dá);Western blot法檢測15-LOX-1、PPARγ、P27/Skp2、Bax
2、/Bcl-2蛋白表達(dá);四甲基偶氮唑鹽法(MTT)檢測15-LOX-1和GW9662對胃癌細(xì)胞AGS增殖水平的影響。
結(jié)果:(1)胃癌細(xì)胞AGS中未檢測到15-LOX-1mRNA和蛋白的表達(dá),轉(zhuǎn)染后的AGS表達(dá)有15-LOX-1的mRNA及蛋白。(2)轉(zhuǎn)染15-LOX-1后細(xì)胞周期抑制因子P27表達(dá)較未轉(zhuǎn)染和轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒組顯著上調(diào),而S相激酶相關(guān)蛋白2(Skp2)表達(dá)下降(P<0.05)。(3)轉(zhuǎn)染48小時后,AGS/15-
3、LOX-1組細(xì)胞存活率為58.5%,顯著低于AGS及AGS/PCDNA3.1組(P<0.05)。AGS/15-LOX-1組細(xì)胞加入10uM GW9662作用48小時后,細(xì)胞存活率為76.2%,較GW9662作用前顯著升高(P<0.05)。(4)AGS、AGS/15-LOX-1、AGS/PCDNA3.1組均能檢測到PPARγ mRNA和蛋白的表達(dá),且AGS/15-LOX-1組PPARγ表達(dá)量較其他兩組顯著增多(P<0.05),10uM G
4、W9662能夠下調(diào)AGS/15-LOX-1組PPARγ表達(dá)。(5)AGS/15-LOX-1組Bax蛋白的表達(dá)較AGS和AGS/PCDNA3.1組上調(diào),而Bcl-2蛋白的表達(dá)量下降(P<0.05),加入GW9662作用48h后,AGS/15-LOX-1組Bax/Bcl-2蛋白的表達(dá)量與AGS和AGS/PCDNA3.1組無顯著差別(P>0.05)。
結(jié)論:15-LOX-1可能經(jīng)由PPARγ途徑,通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期蛋白Skp2和P
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