復(fù)方丹參和甲基強的松龍對脊髓損傷大鼠運動功能及iNOS影響.pdf

1、背景:
　　急性脊髓損傷是一種致殘率很高的創(chuàng)傷性疾病。目前臨床治療效果尚不理想,脊髓損傷患者多以不同程度的脊髓功能障礙為結(jié)局。研究認為脊髓損傷后生化和微循環(huán)障礙同時并存且相互影響。而微循環(huán)障礙是脊髓損傷后繼發(fā)性損傷的主要機制,是損傷脊髓功能發(fā)生不可逆轉(zhuǎn)恢復(fù)的主要原因之一。在急性脊髓損傷機制研究中,一氧化氮(Nitric Oxide,NO)與神經(jīng)功能恢復(fù)的關(guān)系日益受到學(xué)者的關(guān)注。有研究表明,過量的NO可導(dǎo)致神經(jīng)細胞調(diào)亡。甲基強的松龍

2、(Methylpre-dnisonlone, MP)具有多種神經(jīng)保護作用,盡管其確切機制尚不清楚,但急性脊髓損傷后早期大劑量甲基強的松龍治療被定為急性脊髓損傷治療的基本原則之一。中藥復(fù)方丹參對大鼠急性脊髓損傷實驗性治療研究發(fā)現(xiàn)其可以促進脊髓灰質(zhì)一氧化氮合酶(Nitric Oxide Synthase, NOS)的表達。并可以促進大鼠后肢體運動功能恢復(fù)。臨床也有復(fù)方丹參用于治療脊髓損傷的報道。但其確切機制尚不清楚。
　　目的:

3、>　　通過觀察和分析大鼠急性脊髓損傷后甲基強的松龍和復(fù)方丹參聯(lián)合治療急性脊髓損傷大鼠后肢運動功能的變化以及脊髓組織NOS陽性神經(jīng)元細胞的表達和細胞凋亡。
　　探討:
　?、購?fù)方丹參治療促進大鼠急性脊髓損傷功能恢復(fù)的作用和分子機理。
　?、诩谆鶑姷乃升堉委煷龠M大鼠急性脊髓損傷功能恢復(fù)的作用和分子機理。
　?、奂谆鶑姷乃升埡蛷?fù)方丹參聯(lián)合治療促進大鼠急性脊髓損傷功能恢復(fù)的作用和分子機理。
　?、芴接懠毙约顾钃p傷更

4、有效的藥物治療方法。為甲基強的松龍和復(fù)方丹參聯(lián)合治療急性脊髓損傷提供一定理論依據(jù)和實驗依據(jù)。
　　材料和方法:
　　2月齡Wistar大鼠40只,體重(200~250g),按2×2析因設(shè)計,隨機均分為脊髓損傷復(fù)方丹參與甲基強的松龍聯(lián)合治療組(A組)、甲基強的松龍治療組(B組)、復(fù)方丹參治療組(C組)以及生理鹽水對照組(D組);實驗動物用20g∕L戊巴比妥鈉(40mg/kg)腹腔注射麻醉,背部正中切口切除T9-11椎板,顯露硬

5、脊膜,建立Allen′s損傷模型,以2.5cm×10 g致?lián)p傷力損傷脊髓。治療后采用BBB行為學(xué)評分方法對實驗大鼠后肢運動功能進行評估;實驗動物取損傷段脊髓組織行蘇木素-伊紅染色,觀察脊髓組織的損傷變化;TUNEL染色觀察細胞凋亡;以及免疫組織化學(xué)染色觀察iNOS陽性神經(jīng)元細胞表達。
　　結(jié)果:
　　〈1〉:四組實驗動物的BBB(Basso, Beattie and Bresnahan, BBB)行為學(xué)評分:①手術(shù)后24小時

6、,四組實驗動物的BBB行為學(xué)評分均為0~1分。②手術(shù)后二周,四組實驗動物的行為學(xué)評分結(jié)果明顯不同,其中A組BBB行為學(xué)評分升高最明顯,為12.5±1.9;B組8.1±0.9,次之;C組6.0±0.8;D組3.9±1.1,最不理想。四組間比較有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。
　　〈2〉HE染色結(jié)果:四組實驗動物的脊髓損傷后有不同程度壞死,D組神經(jīng)元細胞變性壞死最明顯,可見壞死空洞,細胞萎縮,胞漿減少;C組次之,A組最輕。

7、　　〈3〉TUNEL染色:檢測脊髓細胞凋亡結(jié)果顯示A組凋亡細胞最少,為10.5±1.1;B組次之,13.1±2.0;C組為17.4±1.2;D組細胞凋亡最明顯,為23.6±3.0;四組間有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異。
　　〈4〉免疫組化染色結(jié)果顯示:四組實驗動物脊髓灰質(zhì)均有散在的iNOS陽性神經(jīng)元細胞表達;其中C組表達最多,為20.0±1.8;D組17.9±1.9次之;A組為16.0±1.7;B組10.1±1.0最少;四組間比較具有顯著統(tǒng)計

8、學(xué)差異(P<0.01)。
　　結(jié)論:
　?、俅笫蠹毙约顾钃p傷后,脊髓損傷后通過機體的自我修復(fù)機制,其行為學(xué)功能可以有不同程度的恢復(fù)。
　?、诩谆鶑姷乃升埧梢源龠M急性脊髓損傷大鼠后肢功能的恢復(fù),其機制可能與抑制大鼠急性脊髓損傷后脊髓灰質(zhì)中iNOS陽性細胞的表達有關(guān)。
　?、蹚?fù)方丹參促進了大鼠脊髓損傷后損傷脊髓組織中iNOS陽性細胞的表達,促進損傷脊髓功能的恢復(fù)。
　?、芗谆鶑姷乃升埮c復(fù)方丹參單獨使用均可減少了