甲基強(qiáng)的松龍對(duì)急性脊髓損傷Nogo-A蛋白表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景 隨著交通和建筑業(yè)的迅速發(fā)展，急性脊柱脊髓損傷患者增加，在美國(guó)每年大約有10，000人患有嚴(yán)重的脊髓損傷。大多數(shù)損傷患者源于交通意外，墜落傷，暴力或運(yùn)動(dòng)損傷。脊髓損傷的患者大多數(shù)是健康的青壯年，常給患者家庭社會(huì)帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)。因此研究脊髓損傷的治療具有重要意義，也是目前世界上需待解決和研究的重點(diǎn)課題之一。 急性脊髓損傷治療主要分為手術(shù)治療和非手術(shù)治療。手術(shù)治療的目的是通過(guò)手術(shù)減壓、固定解除受傷節(jié)段脊髓所受到的壓迫

2、并恢復(fù)脊柱的解剖結(jié)構(gòu)和保持其穩(wěn)定性，防止繼發(fā)性脊髓損傷，保存殘留的神經(jīng)單元，為受損脊髓的功能恢復(fù)提供必要的外部環(huán)境。藥物治療主要目的是通過(guò)藥物減輕或者抑制脊髓出現(xiàn)的各種繼發(fā)性損傷，促進(jìn)神經(jīng)纖維或者神經(jīng)元軸突的再生和修復(fù)。 目前臨床上對(duì)于藥物治療急性脊髓損傷的研究較多，由于成熟的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(centralnervoussystem,CNS)固有的極其微弱的再生修復(fù)能力，導(dǎo)致目前臨床上治療脊髓損傷的藥物具有明確效果并不多。成熟的C

3、NS再生能力極其微弱主要與內(nèi)外兩個(gè)因素有關(guān)：一是CNS神經(jīng)元自身缺乏足夠的再生能力；二是CNS再生的微環(huán)境中各種外源性、內(nèi)源性生長(zhǎng)抑制因子的影響。目前大部分人認(rèn)為，CNS再生能力弱與外部微環(huán)境起主要作用。 脊髓損傷后的再生和修復(fù)目前在世界上仍然是脊髓損傷治療過(guò)程中難以解決的問(wèn)題。目前的研究中，脊髓少突膠質(zhì)細(xì)胞所分泌的Nogo-A蛋白是已知最強(qiáng)的神經(jīng)軸突生長(zhǎng)抑制因子，對(duì)于受損神經(jīng)元再生具有極強(qiáng)的抑制作用。一些研究表明在急性脊髓損傷

4、的各個(gè)時(shí)期脊髓組織中Nogo-A的表達(dá)量具有明顯的差異，更有實(shí)驗(yàn)研究表明通過(guò)抑制Nogo-A蛋白的表達(dá)有助于脊髓損傷的修復(fù)和再生。 研究目的 目前被公認(rèn)為甲基強(qiáng)的松龍(methylprednisoloneMP)是對(duì)急性脊髓損傷有肯定療效的藥物，其對(duì)神經(jīng)元的損傷后保護(hù)及修復(fù)具有明顯的效果。既往許多多研究多認(rèn)為MP的最主要的藥理作用是抑制過(guò)氧化和抗炎癥反應(yīng)，而近年來(lái)很多實(shí)驗(yàn)表明MP對(duì)神經(jīng)細(xì)胞蛋白質(zhì)的表達(dá)具有一定的調(diào)節(jié)作用。但

5、甲基強(qiáng)的松龍能否影響Nogo-A的表達(dá)少有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立急性大鼠脊髓損傷模型，早期尾靜脈靜注大劑量甲基強(qiáng)的松龍(methylprednisoloneMP)，于不同時(shí)間點(diǎn)采集受傷節(jié)段大鼠脊髓，通過(guò)HE染色和免疫組化染色觀察損傷后的脊髓組織Nogo-A的分布，測(cè)定其Nogo-A表達(dá)量并進(jìn)行定量分析，同時(shí)觀察甲基強(qiáng)的松龍對(duì)Nogo-A表達(dá)是否有影響。 研究方法 本研究運(yùn)用Allen's打擊方法，復(fù)制急性脊髓損傷大鼠模型，

6、將SD大鼠分為正?；A(chǔ)對(duì)照組、急性脊髓損傷組(對(duì)照組)和急性脊髓損傷+大劑量MP組，損傷大鼠T8-T10節(jié)段，大劑量甲基強(qiáng)的松龍?jiān)趽p傷早期尾靜脈注射治療，分別在術(shù)后3、7、14天取受損節(jié)段大鼠脊髓，運(yùn)用Western—blot方法測(cè)定各時(shí)間點(diǎn)Nogo-A表達(dá)量及其變化，觀察大劑量甲基強(qiáng)的松龍對(duì)Nogo-A表達(dá)是否有影響，同時(shí)通過(guò)HE染色，觀察大劑量甲基強(qiáng)的松龍治療急性脊髓損傷大鼠脊髓組織的形態(tài)學(xué)變化；通過(guò)免疫組化定性分析大劑量甲基強(qiáng)的松

7、龍治療急性脊髓損傷大鼠脊髓組織Nogo-A的表達(dá)變化。 研究結(jié)果 1.損傷組早期出現(xiàn)脊髓組織充血，脊髓組織神經(jīng)纖維逐漸壞死，損傷大鼠脊髓組織出現(xiàn)神經(jīng)纖維斷裂，消亡，脊髓組織呈空泡樣的變化明顯增加，少突膠質(zhì)細(xì)胞核數(shù)量較正常組明顯減少。在正常組中Nogo-A免疫組化染色呈弱陽(yáng)性，而在損傷后大鼠脊髓組織少突膠質(zhì)細(xì)胞Nogo-A免疫組化染色呈陽(yáng)性和強(qiáng)陽(yáng)性，但是對(duì)照組和治療組差異不明顯。 2.在大鼠急性損傷脊髓組織中，No

8、go-A蛋白表達(dá)量明顯增加，其中7天＞14天＞3天，這與一些研究證實(shí)Nogo-A在急性脊髓損傷中呈逐漸升高，第7天達(dá)到高峰，然后逐漸降低是一致的。 3.在大劑量MP治療的大鼠急性損傷脊髓組織中各個(gè)時(shí)間點(diǎn)Nogo—A的表達(dá)量較對(duì)照組明顯降低，說(shuō)明MP對(duì)于急性脊髓損傷大鼠脊髓中Nogo-A的表達(dá)有一定的抑制作用。 研究結(jié)論 1.通過(guò)免疫組化和HE染色能夠較好的觀察急性脊髓損傷后SD大鼠脊髓組織的病理變化，能夠定性分析