錦鯉皰疹病毒Nested-PCR檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用.pdf

1、錦鯉皰疹病毒(KoiHerpesvirus，KHV)是錦鯉皰疹病毒病(KoiHerpesvirusDisease，KHVD)的病原，它主要感染錦鯉和鯉魚(yú)，魚(yú)苗和成魚(yú)死亡率均達(dá)到80％以上。1998年在以色列，美國(guó)和德國(guó)分別有報(bào)道分離到該病毒，目前，世界上已有多個(gè)國(guó)家暴發(fā)過(guò)錦鯉皰疹病毒病。我國(guó)的東北地區(qū)在近兩年也有報(bào)道發(fā)生過(guò)錦鯉皰疹病毒病。該病能引起魚(yú)的鰓壞死，腎炎和眼窩凹陷等癥狀。KHV所帶來(lái)的高致死率和長(zhǎng)期潛伏感染已引起國(guó)際獸疫局(O

2、IE)的高度關(guān)注，同時(shí)我國(guó)在2008年，農(nóng)業(yè)部第1125號(hào)公告中，將錦鯉皰疹病毒病列為二類動(dòng)物疫病。
　　 本試驗(yàn)在國(guó)內(nèi)外KHVPCR檢測(cè)方法的基礎(chǔ)上，建立了KHVNested-PCR檢測(cè)方法，優(yōu)化了引物濃度，退火溫度和循環(huán)次數(shù)等反應(yīng)條件，該P(yáng)CR檢測(cè)方法的靈敏度為0.01pg。針對(duì)擴(kuò)增到的目的片段，進(jìn)行分離純化測(cè)序，并與目前已經(jīng)完整測(cè)序的3株KHV進(jìn)行比對(duì)，相似程度達(dá)到98％以上，蛋白比對(duì)結(jié)果也表明該蛋白屬于KHV病毒粒子的相

3、關(guān)蛋白。試驗(yàn)中擴(kuò)增的ORF26基因片段經(jīng)過(guò)軟件分析，有著良好的抗原性，有可能成為基因工程疫苗的目的片段。
　　 本研究還對(duì)我國(guó)江蘇，浙江，安徽和山東等地部分城市的錦鯉，食用鯉魚(yú)和鯽魚(yú)進(jìn)行錦鯉皰疹病毒的分子流行病學(xué)檢測(cè)。在南京等8個(gè)城市或地區(qū)發(fā)現(xiàn)有錦鯉皰疹病毒基因組DNA的存在。另外，本試驗(yàn)首次在我國(guó)的鯽魚(yú)中檢測(cè)到錦鯉皰疹病毒的存在。
　　 試驗(yàn)中大部分樣品魚(yú)體征正常，無(wú)明顯的眼觀病變，但通過(guò)本試驗(yàn)的Nested-PCR檢