萬傷合劑對小鼠脛骨缺損模型愈合影響的研究.pdf

1、目的：
　　 探討萬傷合劑促進小鼠脛骨缺損愈合的體外、體內機制。
　　 方法：
　　 體外實驗：萬傷合劑濃縮液對IL-1β-luciferase（白介素1-β-熒光素酶）轉基因小鼠腹腔巨噬細胞IL-1β表達的影響；大鼠含藥血清對原代培養(yǎng)成骨細胞活性及上清的堿性磷酸酶表達的影響。體內實驗：建立脛骨缺損模型，以microCT(顯微CT)動態(tài)研究脛骨缺損模型自然愈合過程；脛骨缺損模型小鼠分別給予萬傷合劑、OPG（成骨生

2、長肽）、萬傷合劑加OGP、水，給藥后檢測血清堿性磷酸酶、離子鈣、無機磷等生化指標；檢測造模第10天，第20天血清必須氨基酸含量；應用免疫組化法與免疫印跡法檢測脛骨缺損修復處VEGF（內血管內皮生長因子）的表達。同時檢測了萬傷合劑濃縮液內堿性磷酸酶、鈣、磷及氨基酸濃度。
　　 結果：
　　 體外實驗：萬傷合劑組巨噬細胞的熒光值表達顯著高于LPS（脂多糖）組(p＜0.05)。大鼠含藥血清對培養(yǎng)的成骨細胞的細胞活性無提高作用，

3、而10％濃度單日連續(xù)給藥的大鼠含藥血清的堿性磷酸酶濃度顯著大于對照組(p＜0.05)。體內實驗：在脛骨缺損的自然修復過程中，microCT檢查發(fā)現其骨礦物質含量、骨密度、三維校準骨小梁厚度均隨時間逐漸增高趨勢，三維校準骨小梁分離度隨時間逐漸降低，骨小梁數目術后一直低于術前，且術后各時間點之間無明顯差異，骨體積分數逐漸增高，骨表面積與體積比值于術后先升高后降低。對脛骨缺損小鼠模型研究發(fā)現給藥組小鼠堿性磷酸酶表達水平顯著低于對照組(分別為p

4、＜0.05;p＜0.01;p＜0.001)。而血清鈣離子測定：萬傷合劑組、OGP組的血鈣水平較為穩(wěn)定顯著低于對照組，萬傷合劑加OGP組術后血清鈣離子濃度顯著高于對照組，呈先升高后降低趨勢。血清無機磷測定發(fā)現用藥組血清無機磷顯著低于對照組。血清氨基酸測定：用藥組小鼠第20天血清精氨酸、亮氨酸、賴氨酸、脯氨酸含量均顯著高于對照組，而第10天，上述指標無此變化。免疫組化及免疫印跡發(fā)現骨組織在用藥后VEGF表達顯著上調。
　　 結論：<

5、br>　　 體外實驗發(fā)現：萬傷合劑可以通過上調IL-1β的表達起到促成骨、促礦化的作用；未發(fā)現大鼠含藥血清對成骨細胞增殖有明顯影響，但單日連續(xù)給藥的大鼠血清可以有效促進成骨細胞上清堿性磷酸酶表達。體內實驗發(fā)現：microCT可以反映脛骨骨缺損模型的動態(tài)修復過程。萬傷合劑能抑制骨折修復過程的溶骨反應，促進成骨反應，加快骨修復：可以提高促骨損傷修復所需的氨基酸含量，從而達到加快骨折愈合的效果。萬傷合劑促進骨修復的過程與促進VEGF表達密切