丙戊酸增強(qiáng)人卵巢癌耐藥細(xì)胞株COC1-DDP對順鉑敏感性的研究.pdf

1、研究背景、目的：
　　 化療耐藥是目前惡性腫瘤治療中急需解決的難題。卵巢癌對化療的耐藥性是影響卵巢癌患者五年生存率的一個(gè)重要因素。不少逆轉(zhuǎn)劑(如維拉帕米、三苯氧胺等),由于達(dá)到逆轉(zhuǎn)作用時(shí)所需的劑量對人體產(chǎn)生明顯的毒副作用,因此限制了它們的臨床應(yīng)用。國外報(bào)道組蛋白去乙?；敢种苿?histon-deacetylaseinhibitors,HDACIs)具有誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化、細(xì)胞周期阻滯和凋亡,逆轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)移性腫瘤的惡性表型,以及增強(qiáng)放化

2、療敏感性等生物學(xué)效應(yīng)。HDACIs對放化療增敏作用的機(jī)制非常復(fù)雜,至今還未完全闡明。丙戊酸(valproic acid,VPA)是臨床上被廣泛應(yīng)用的廣譜抗癲癇藥,最近發(fā)現(xiàn)其具有抑制HDAC活性的作用,因其半衰期長、生物利用度高、有效血藥濃度低、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn),而顯示出良好的臨床應(yīng)用前景。本研究旨在探討丙戊酸是否可以增強(qiáng)卵巢癌耐藥細(xì)胞COCl/DDP對順鉑的敏感性并初步探討其增敏的可能機(jī)制,并為臨床用藥提供理論指導(dǎo)。
　　 方法

3、
　　 本實(shí)驗(yàn)選取人卵巢癌耐藥細(xì)胞株COCl/DDP作為實(shí)驗(yàn)研究對象,采用體外細(xì)胞培養(yǎng)的方式,實(shí)驗(yàn)時(shí)選擇處于對數(shù)生長期的細(xì)胞。設(shè)立對照組、單用順鉑組、順鉑與丙戊酸聯(lián)合組;倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;以WST-1為指標(biāo)檢測不同藥物處理前后人卵巢癌耐藥細(xì)胞株COCl/DDP的增殖變化情況;流式細(xì)胞儀分析不同藥物處理前后細(xì)胞的凋亡情況;免疫細(xì)胞化學(xué)分析法分析不同藥物處理前后NF-κB P65的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13

4、.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,P∠0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,統(tǒng)計(jì)方法使用單因素方差分析和t檢驗(yàn)。
　　 結(jié)果
　　 不同藥物處理人卵巢癌耐藥細(xì)胞COCl/DDP,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化:對照組細(xì)胞生長狀態(tài)良好,順鉑組細(xì)胞數(shù)目減少,胞漿內(nèi)出現(xiàn)空泡,體積縮小,丙戊酸聯(lián)合順鉑組細(xì)胞數(shù)目減少更加明顯,視野內(nèi)可見懸浮團(tuán)簇狀的凋亡細(xì)胞;WST-1增殖抑制實(shí)驗(yàn)顯示:作用24、48、72小時(shí)后丙戊酸與順鉑聯(lián)合用藥細(xì)胞生長抑制率分別

5、為(73.25±11.39、82.13±0.72、97.77±1.05)％明顯強(qiáng)于單用順鉑組(44.76±2.15、71.64±3.98、93.32±1.98)％,兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示丙戊酸與順鉑聯(lián)合組的凋亡率為(48.50±5.428)％明顯高于順鉑單用組凋亡率(23.27±1.93)％,兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);免疫細(xì)胞化學(xué)分析法顯示:單用順鉑組NF-κB P65的陽性表達(dá)率8

6、0％明顯高于對照組NF-κB P65的陽性表達(dá)率20％,兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),表明順鉑可以激活NF-κB,從而產(chǎn)生化療耐藥。丙戊酸與順鉑聯(lián)合組NF.K B P65的陽性表達(dá)率為10％明顯低于單用順鉑組NF-κBP65的陽性表達(dá)率80％,且兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),表明丙戊酸可以抑制NF-κB的激活,一定程度上逆轉(zhuǎn)人卵巢癌耐藥細(xì)胞COCl/DDP對順鉑的耐藥性。
　　 結(jié)論
　　 組蛋白