分化抑制因子3對順鉑耐藥株A549-DDP細胞凋亡和順鉑敏感性影響的研究.pdf

1、分化抑制因子(Id)，是一組缺乏結(jié)合DNA功能的螺旋—環(huán)—螺旋(helix—loop—helix，HLH)轉(zhuǎn)錄因子，通過與堿性HLH(bHLH)結(jié)合形成異二聚體而影響受bHLH調(diào)控的細胞特異性基因的表達。在人類，迄今共發(fā)現(xiàn)四種Id蛋白即Id1～Id4。人Id3基因定位于染色體1p36.1。Id3參與多種細胞的生物學過程，包括T細胞和B細胞的發(fā)育、骨骼肌的分化、血管平滑肌的增殖、胚胎的神經(jīng)形成、骨發(fā)生和腫瘤誘導的血管發(fā)生等。新近研究表明，

2、Id3基因表達調(diào)控的途徑和機制的復雜性決定了其功能的多樣性，在腫瘤細胞的發(fā)生、分化、增殖和凋亡中發(fā)揮著重要作用。 目的：探討人Id3基因體外轉(zhuǎn)染耐順鉑人肺腺癌細胞株A549/DDP細胞后對其凋亡及抗腫瘤藥物順鉑(DDP)的敏感性的影響。 方法：在前期構建人Id3基因和增強型綠色熒光蛋白(EGFP)真核表達載體Id3/pEGFP的基礎上，采用脂質(zhì)體介導的轉(zhuǎn)染技術將Id3融合基因(Id3—pEGFP)導入A549/DDP細胞

3、，倒置熒光顯微鏡下觀察細胞內(nèi)EGFP的表達；半定量RT—PCR和Western—blotting檢測Id3表達的改變；流式細胞術(FCM)檢測Id3對A549/DDP細胞凋亡的影響，Hoechst33258染色觀察轉(zhuǎn)染的細胞核形態(tài)學變化，MTT法觀察Id3對細胞增殖功能的影響，加入不同濃度的順鉑對轉(zhuǎn)染后的A549/DDP細胞增殖的抑制情況。 結(jié)果：RT—PCR和Western—blotting結(jié)果顯示，Id3mRNA及蛋白在轉(zhuǎn)染

4、Id3/pEGFP的A549/DDP細胞的表達明顯上調(diào)；倒置熒光顯微鏡下，可見轉(zhuǎn)染的A549/DDP細胞發(fā)出強綠色熒光，轉(zhuǎn)pEGFP組的熒光均勻分布于整個細胞內(nèi)，而轉(zhuǎn)Id3/pEGFP組的熒光主要表達于細胞核；AnnexinV/7—AAD雙染聯(lián)合Hoechst染色結(jié)果表明，Id3/pEGFP轉(zhuǎn)染組細胞的早期凋亡率明顯高于pEGFP轉(zhuǎn)染組和未轉(zhuǎn)染組；MTT法結(jié)果表明，轉(zhuǎn)染Id3/pEGFP的細胞增殖被抑制，順鉑對轉(zhuǎn)染Id3的A549/DD