分化抑制因子3對(duì)順鉑耐藥株A549-DDP細(xì)胞凋亡和順鉑敏感性影響的研究.pdf

1、分化抑制因子(Id)，是一組缺乏結(jié)合DNA功能的螺旋—環(huán)—螺旋(helix—loop—helix，HLH)轉(zhuǎn)錄因子，通過(guò)與堿性HLH(bHLH)結(jié)合形成異二聚體而影響受bHLH調(diào)控的細(xì)胞特異性基因的表達(dá)。在人類，迄今共發(fā)現(xiàn)四種Id蛋白即Id1～I(xiàn)d4。人Id3基因定位于染色體1p36.1。Id3參與多種細(xì)胞的生物學(xué)過(guò)程，包括T細(xì)胞和B細(xì)胞的發(fā)育、骨骼肌的分化、血管平滑肌的增殖、胚胎的神經(jīng)形成、骨發(fā)生和腫瘤誘導(dǎo)的血管發(fā)生等。新近研究表明，

2、Id3基因表達(dá)調(diào)控的途徑和機(jī)制的復(fù)雜性決定了其功能的多樣性，在腫瘤細(xì)胞的發(fā)生、分化、增殖和凋亡中發(fā)揮著重要作用。 目的：探討人Id3基因體外轉(zhuǎn)染耐順鉑人肺腺癌細(xì)胞株A549/DDP細(xì)胞后對(duì)其凋亡及抗腫瘤藥物順鉑(DDP)的敏感性的影響。 方法：在前期構(gòu)建人Id3基因和增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)真核表達(dá)載體Id3/pEGFP的基礎(chǔ)上，采用脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)將Id3融合基因(Id3—pEGFP)導(dǎo)入A549/DDP細(xì)胞

3、，倒置熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)EGFP的表達(dá)；半定量RT—PCR和Western—blotting檢測(cè)Id3表達(dá)的改變；流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)Id3對(duì)A549/DDP細(xì)胞凋亡的影響，Hoechst33258染色觀察轉(zhuǎn)染的細(xì)胞核形態(tài)學(xué)變化，MTT法觀察Id3對(duì)細(xì)胞增殖功能的影響，加入不同濃度的順鉑對(duì)轉(zhuǎn)染后的A549/DDP細(xì)胞增殖的抑制情況。 結(jié)果：RT—PCR和Western—blotting結(jié)果顯示，Id3mRNA及蛋白在轉(zhuǎn)染

4、Id3/pEGFP的A549/DDP細(xì)胞的表達(dá)明顯上調(diào)；倒置熒光顯微鏡下，可見(jiàn)轉(zhuǎn)染的A549/DDP細(xì)胞發(fā)出強(qiáng)綠色熒光，轉(zhuǎn)pEGFP組的熒光均勻分布于整個(gè)細(xì)胞內(nèi)，而轉(zhuǎn)Id3/pEGFP組的熒光主要表達(dá)于細(xì)胞核；AnnexinV/7—AAD雙染聯(lián)合Hoechst染色結(jié)果表明，Id3/pEGFP轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的早期凋亡率明顯高于pEGFP轉(zhuǎn)染組和未轉(zhuǎn)染組；MTT法結(jié)果表明，轉(zhuǎn)染Id3/pEGFP的細(xì)胞增殖被抑制，順鉑對(duì)轉(zhuǎn)染Id3的A549/DD