PP242增強卵巢癌細胞株的化療敏感性及其機制研究.pdf

1、第一部分PP242增強卵巢癌細胞株的化療敏感性及其機制研究
　　【目的】研究哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制劑III—PP242聯(lián)合應用泰素對人卵巢癌細胞株A2780和SKOV3的影響,并初步探討其內在分子機制。
　　【方法】不同濃度的泰素處理A2780和SKOV3細胞,四甲基偶氮唑藍(MTT)比色法檢測細胞增殖抑制率,流式細胞術檢測其凋亡情況;蛋白免疫印跡法分析mTOR抑制劑PP242處理A2780和SKOV3細胞后

2、mTOR及其下游分子的表達情況;PP242聯(lián)合泰素處理A2780和SKOV3細胞,流式細胞儀和Hoechst33342染色檢測細胞凋亡;免疫熒光染色觀察細胞漿微管結構的變化。
　　【結果】隨泰素濃度的升高和時間的延長,A2780和SKOV3細胞的凋亡率逐漸升高,但兩種細胞在24h時隨泰素濃度的升高而凋亡率變化不明顯,SKOV3細胞在48h和72h時凋亡率變化不明顯。PP242作用24h后A2780和SKOV3細胞的磷酸化mTOR、

3、磷酸化S6K1及Survivin蛋白表達下降。PP242聯(lián)合泰素處理細胞凋亡率明顯增加,以48h作用最明顯。Hoechst33342染色顯示細胞核固縮、碎裂明顯,免疫熒光染色示胞質內微管蛋白(tubulin)分布明顯改變。
　　【結論】mTOR抑制劑III—PP242通過下調p-mTOR、p-S6K1和Survivin蛋白可明顯增強卵巢癌細胞株A2780和SKOV3泰素化療的敏感性。
　　第二部分STAT3抑制劑逆轉卵巢癌細

4、胞株化療耐藥的研究
　　【目的】通過檢測信號轉導和轉錄激活因子(STAT)3在卵巢癌順鉑敏感細胞株OV2008和配對的順鉑耐藥細胞株C13K中的表達情況,研究Stat3小分子抑制劑Stattic對OV2008及C13K細胞順鉑治療的影響,并探討其分子機制。
　　【方法】半定量RT-PCR檢測OV2008和C13K細胞Stat3的mRNA表達水平,蛋白免疫印跡法檢測磷酸化Stat3(p-Stat3)的蛋白表達水平。四甲基偶氮唑

5、藍(MTT)比色法檢測單用順鉑對細胞增殖的影響。流式細胞儀分析卵巢癌細胞株在Stat3抑制劑和(或)順鉑作用下的凋亡率及蛋白免疫印跡法檢測p-Stat3、p-Akt和抗凋亡因子Bcl-XL的蛋白表達。
　　【結果】與順鉑敏感細胞株OV2008相比,順鉑耐藥細胞株C13K的Stat3mRNA和p-Stat3蛋白均過表達。小分子抑制劑Stattic可阻斷Stat3的活化,導致順鉑誘導OV2008和C13K細胞的凋亡率明顯增加。Stat