AdA-fos轉(zhuǎn)表達(dá)對(duì)卵巢癌細(xì)胞株3AO-DDP順鉑耐藥性逆轉(zhuǎn)作用的研究.pdf

1、目的：探討AdA-FOS對(duì)體外培養(yǎng)的卵巢癌細(xì)胞3AO/DDP順鉑耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用及其機(jī)制，為臨床逆轉(zhuǎn)卵巢癌多藥耐藥性提供新的治療靶點(diǎn)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：本研究將含有突變型AdA-fos基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)菌，選取特異引物PCR擴(kuò)增陽(yáng)性的克隆進(jìn)行檢測(cè)鑒定，將檢測(cè)確認(rèn)的大腸桿菌克隆進(jìn)行搖菌、質(zhì)粒抽提并純化、定量，命名為PCDNA3.1/AdA-fos。以Fugene6類脂質(zhì)體轉(zhuǎn)基因試劑介導(dǎo)將PCDNA3.1/AdA

2、-fos轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的卵巢癌耐藥細(xì)胞株3AO/DDP作為實(shí)驗(yàn)組，轉(zhuǎn)染空載體PCDNA3.1的卵巢癌耐藥細(xì)胞株3AO/DDP及單純的3AO/DDP細(xì)胞株分別作為空載體對(duì)照組及空白對(duì)照組。RT-PCR及DNA瓊脂糖凝膠電泳法分析外源基因的表達(dá)；將以上各組細(xì)胞分別加入DDP，倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；DNA瓊脂糖凝膠電泳法對(duì)細(xì)胞凋亡情況進(jìn)行檢測(cè)；抗單鏈DNA(ssDNA)單克隆抗體(mAb)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)轉(zhuǎn)染AdA-fos后DD

3、P對(duì)3AO/DDP細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用，并根據(jù)凋亡率判斷AdA-fos轉(zhuǎn)染對(duì)3AO/DDP細(xì)胞耐藥的逆轉(zhuǎn)作用。 結(jié)果：應(yīng)用Fugene6類脂質(zhì)體將真核表達(dá)載體PCDNA3.1/AdA-fos成功地轉(zhuǎn)染3AO/DDP細(xì)胞。經(jīng)RT-PCR及DNA瓊脂糖凝膠電泳分析證實(shí)AdA-fos轉(zhuǎn)染后在3AO/DDP細(xì)胞中有AdA-fos基因表達(dá)；在DDP的作用下，耐藥卵巢癌細(xì)胞3AO/DDP增殖活性明顯受到抑制；耐藥細(xì)胞出現(xiàn)包括凋亡小體、梯形電泳