2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、皮膚惡性黑素瘤起源于黑素細胞,致死率高,轉(zhuǎn)移后無有效療法。miRNAs是一類新發(fā)現(xiàn)的在腫瘤中發(fā)揮癌基因或抑癌基因樣作用的小分子RNA。本課題研究miRNA-let-7a在皮膚黑素瘤發(fā)病機制中的作用,尋找皮膚黑素瘤新的早期診斷標(biāo)記和治療靶點。
   目的
   研究 miRNA-let-7a在福爾馬林固定石蠟包埋(FFPE)的皮膚黑素瘤組織和黑素瘤細胞系A(chǔ)375中的表達,探討miRNA-let-7a對黑素瘤細胞系A(chǔ)375細

2、胞增殖和凋亡的影響及其作用機制;研究BRAF蛋白在黑素瘤細胞系A(chǔ)375和原代黑素細胞的表達差異,探索miRNA-let-7a對黑素瘤發(fā)病中關(guān)鍵蛋白BRAF的作用。
   方法:
   選取福爾馬林固定石蠟包埋的黑素瘤組織13例,先天性色素痣組織10例,培養(yǎng)黑素瘤細胞系A(chǔ)375和原代黑素細胞,分別采用High Pure miRNA Isolation試劑盒和RNAiso Plus抽提miRNA及總RNA,逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,

3、用Taqman MGB探針和相應(yīng)的引物,在ABI Prism7500熒光定量PCR儀上進行實時熒光定量PCR。對SDS軟件生成的數(shù)值進行計算和統(tǒng)計學(xué)分析。
   蛋白質(zhì)印跡法檢測BRAF蛋白在黑素瘤細胞系.A375及原代黑素細胞的表達差異。
   應(yīng)用cy3標(biāo)記的siRNA轉(zhuǎn)染.A375細胞,熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率。利用hsa-let-7a的模擬物及其陰性對照分別瞬時轉(zhuǎn)染黑素瘤細胞系A(chǔ)375,CCK-8實驗計算轉(zhuǎn)染后兩

4、組細胞增殖的差異,流式細胞術(shù)檢測兩組細胞凋亡的不同,免疫印跡實驗分析兩組細胞Caspase-3(半胱天冬酶-3)蛋白和BRAF蛋白的表達差異。
   結(jié)果:
   從福爾馬林固定石蠟包埋的組織中成功抽提出miRNA,實時熒光定量PCR結(jié)果顯示miRNA-let-7a在FFPE黑素瘤組織中的表達明顯低于色素痣組織(P<0.05),在黑素瘤細胞系A(chǔ)375中的表達明顯低于原代黑素細胞。熒光顯微鏡下觀察可見siRNA的轉(zhuǎn)染效率約

5、80~90%。與陰性對照相比,50nM的hsa-let-7a模擬物轉(zhuǎn)染A375細胞后,miRNA-let-7a的表達升高2.067倍。采用miRNA-let-7a的模擬物轉(zhuǎn)染后,與陰性對照相比,A375細胞增殖受抑,細胞凋亡增加(P<0.05)。與黑素細胞相比,BRAF蛋白在黑素瘤A375細胞系表達升高;與陰性對照相比,miRNA let-7a的模擬物轉(zhuǎn)染A375細胞系后,caspase-3蛋白和BRAF蛋白表達均下降。
  

6、結(jié)論:
   FFPE組織適合用來研究miRNA在黑素瘤中的表達,miRNA-let-7a在黑素瘤中表達下調(diào),過表達miRNA-let-7a可抑制黑素瘤細胞系A(chǔ)375細胞的增殖并促進其凋亡,促進凋亡的機制可能與miRNA-let-17a下調(diào)caspase-3有關(guān)。黑素瘤發(fā)病中的關(guān)鍵蛋白BRAF在黑素瘤細胞系A(chǔ)375中的表達明顯高于原代黑素細胞,miRNA-let-7a可下調(diào)BRAF蛋白的表達??傊?,miRNA-let-7a可能在

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