趨化性細胞因子CCL18對黑素瘤細胞系生物學行為影響的研究.pdf

1、皮膚惡性黑素瘤是一種高度惡性腫瘤，目前研究認為任何細胞都能分泌細胞因子并表達其受體，而細胞因子在腫瘤細胞的表達已引起廣泛的關注和研究，它們是腫瘤細胞侵襲轉移的路標。部分黑素瘤細胞系能產生細胞因子并表達其受體，無論阻斷配體還是受體都能抑制腫瘤細胞的生長。我們的前期研究，采用全人類基因組芯片對中國人肢端黑素瘤組織的研究發(fā)現(xiàn)，趨化性細胞因子CCL18在腫瘤組織的表達明顯增高。本研究利用IL-4誘導人單核細胞產生的CCL18、重組CCL18細胞

2、因子與A375黑素瘤細胞株共培養(yǎng)，探討其在黑素瘤生物學行為方面的作用。
　　 第一部分：人單核細胞的分離、誘導及CCL18表達的檢測
　　 使用密度梯度離心法成功分離人單核細胞，并使用IL-4成功誘導單核細胞，經ELISA和Western-blotting驗證，誘導的單核細胞可產生CCL18，非誘導的單核細胞不能產生CCL18。
　　 第二部分：CCL18細胞因子對A375黑素瘤細胞株增殖、轉移及血管增殖的影響<

3、br>　　 誘導人單核細胞產生CCL18，與重組人CCL18細胞因子，分別與A375黑素瘤細胞株共培養(yǎng)，通過MTT法檢測CCL18對A375增殖的影響；通過趨化試驗及重組基底膜侵襲實驗，測定CCL18對腫瘤細胞的趨化能力及侵襲作用；通過將A375黑素瘤細胞株接種于雞胚尿囊膜，測定不同情況下CCL18對腫瘤血管生成的影響。結果提示無論是誘導還是重組CCL18細胞因子都不是影響腫瘤增殖的主要細胞因子，IL-4誘導產生CCL18的單核細胞組

4、及CCL18重組細胞因子組與對照組比較均對腫瘤細胞存在趨化作用，并促進腫瘤細胞的轉移；IL-4誘導組及重組CCL18組在雞胚尿囊膜試驗中可促進腫瘤血管的生成作用。
　　 第三部分：CCL18細胞因子對A375黑素瘤細胞裸鼠內成瘤作用的影響
　　 裸鼠成瘤的模型顯示，CCL18細胞因子可能以某種機制抑制A370移植瘤體積的增加。腫瘤組織切片經Ki-67、Bcl-2免疫組化染色及TUNEL原位凋亡染色后分析，發(fā)現(xiàn)誘導及重組C

5、CL18在A375黑素瘤細胞系體內試驗中可促進腫瘤的增殖，抑制腫瘤細胞的凋亡。
　　 第四部分：免疫組化研究CCL18在皮膚惡性黑素瘤的表達
　　 使用免疫組化對67例黑素細胞來源的良、惡性腫瘤進行分析，結果顯示良性痣、Spitz痣及發(fā)育不良性痣不表達CCL18，而黑素瘤表達CCL18，且CCL18的表達與腫瘤浸潤深度呈正比。
　　 第五部分：小結
　　 CCL18可能與黑素瘤的進展有關，并調節(jié)腫瘤的生物