銅綠假單胞菌生物被膜形成早期相關(guān)基因的研究.pdf

1、學(xué)校代碼：1 0 0 5 5學(xué)號(hào)： M 0 2 0 6 4 4論文題目：銅綠假單胞菌生物被膜形成早期相關(guān)基因的研究碩士學(xué)位論文培養(yǎng)院系：一級(jí)學(xué)科：二級(jí)學(xué)科：論文作者：指導(dǎo)教師：生命科學(xué)學(xué)院生物學(xué)微生物學(xué)姚宏明喬明強(qiáng)教授南開大學(xué)研究生院2 0 0 5 年5 月2 0 日摘要A B S T R A C TP s e u d o m o n a sa e r u g i n o s ai s a n i m p o r t a n to p

2、p o r t u n i s t i c p a t h o g e no fh L u n a n s ．T h eb a c t e r i a c a nc o l o n i z e av a r i e t yo fs u r f a c e s a n df o r mb i o f i l m ，w h i c h c a u s e sp e r s i s t e n t i n f e c t i o n i n

3、t h e h o s t S w i m m i n g m o t i l i t y m e d i a t e d b y f l a g e l l u m m a dt w i t c h i n gm o t i l i t ym e d i a t e db yt y p eI Vp i l i p l a y v e r yi m p o r t a n tr o l ei nt h ei n i t i a t i

4、o no f b i o f i l m f o r m a t i o n ，m u t a n t s d e f i c i e n t i nt w i t c h i n ga n ds w i m m i n gl o s sa b i l i t yo fi n i t i a t i n gb i o f i l m f o r m a t i o n ．I nt h i ss t u d y ，M u t r a n

5、s p o s i t i o nt e c h n i q u eW a S u s e dt os t u d y t h eg e n e si n v o l v e di n t w i t c h i n g ，s w i m m i n ga n d s w a r m i n g o f 衛(wèi)a e r u g i n o s as t r a i n P A 6 8 ，w h i c hw a si s o l a t

6、e d f r o map a t i e n tw i t hb r o n c h i e c t a s i s ．T h e e l e c t r o p o r a t i o n c o n d i t i o n s o fPa e r u g i n o s aw e r eo p t i m i z e d ，a n d4m u t a n t sd e f i c i e n ti n s w i m m i n

7、g m o t i l i t y , 3m u t a n t sd e f i c i e n t i nt w i t c h i n g m o t i l i t ya n d4 m u t a n t sd e f i c i e n t i ns w a r m i n gm o t i l i t yi n c l u d i n g2m u t a n t sd e f i c i e n ti nb o t hs w

8、 i m m i n gm o t i l i t y a n dt w i t c h i n gm o t i l i t yw e r ei s o l a t e do u t o fa b o u t6 0 0 m i n i - M ui n s e r t i o nm u t a n t s ．T h e m i n i - M ut r a n s p o s o n i n s e r t i o np o s i

9、t i o n w a s d e t e c t e d b y t h e m e t h o d s o f g e n e c l o n i n g ，D N A s e q u e n c i n g a n dG e n B a n kB L A S T ．T h e r e s u l t sr e v e a l e dt h a tt h em i n i ·M ut r a n s p o s o n h

10、 a d i n s e r t e di n t ot w og e n e so fP A l 5 5 0a n dP A 0 4 1 3 ，r e s p e c t i v e l y , w h i c hr e s u l t i n g i n t o s w i m m i n gm o t i l i t ya n dt w i t c h i n g m o t i l i t y d e f i c i e n t

11、 ．A s t h e f u n c t i o n o fg e n eP A l 5 5 0i s s t i l lu n k n o w n ，i tw a sa n a l y z e db yt h e m e t h o do ft r a n s —c o m p l e m e n t a t i o nw h i c hs h o w e dt h a tt h et w i t c h i n gm o t i

12、l i t ya n d s w i m m i n gm o t i l i t yd e f e c ti n t h eP A l 5 5 0m u t a n tw a su n a b l ec o m p l e m e n t e db yp r o v i n gt h eP A l 5 5 0 g e n ei n l r a n s ．I tw a s d e d u c e dt h a tt h ep r o d

13、 u c t o f P A l 5 5 0 C a r lo n l ya f f e c tt h em o t i l i t yo f P a e r u g i n o s aw i t ht h ec o o p e r a t i o no f s o m e o t h e r f a c t o r s ．C h e m o t a c t i cs y s t e mi s c l o s e r e l a t i

14、 v e t o t h et w i t c h i n g m o t i l i t ya n ds w i m m i n gm o t i l i t y ．B i o i n f o r m a t i ca n a l y s es h o w e d t h a tt h e r ew a sa p o s s i b l ec h e m o t a c t i cs y s t e mc o n s i s t i

15、n gt h eg e n e sf r o mP A l 8 8 0 t oP A 0 1 7 2 ．A st h ep r e d i c t e dp r o d u c t o f P A O l 7 4i sh i g h l yh o m o l o g o u st o t h a to fP A 0 1 7 1 w h i c hw a sp r o v e dt o b e a b l e t oa f f e c t

16、 t h ef l a g e l l a m o t i l i t y , aP A 0 1 7 4m u t a n tw a s c o n s t r u c t e db yg e n er e p l a c e m e n ti nt h e 戶a e r u g i n o s aP A 0 1s t r a i n ．M o t i l i t ya s s a ys h o w e d t h a tP A 0 1