黃芩素對(duì)小鼠腹腔銅綠假單胞菌生物被膜感染的體內(nèi)作用.pdf

1、第一部分小鼠腹腔銅綠假單胞菌生物被膜感染的特點(diǎn)
　　目的：建立小鼠腹腔銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa, P.a）生物被膜（BF）感染模型，觀察小鼠腹腔P.a生物被膜感染特點(diǎn)。
　　方法：（1）構(gòu)建體外 P.a生物被膜：醫(yī)用輸液管（PVC材料）為載體，野生型 PAO1為實(shí)驗(yàn)菌株，體外培養(yǎng)形成早期 P.a生物被膜。（2）構(gòu)建小鼠腹腔 P.a生物被膜感染模型：將14只雌性小鼠隨機(jī)分成無(wú)菌載體植入組（植入

2、無(wú)菌載體）和 P.a感染組（植入上述體外形成早期生物被膜載體）。（3）標(biāo)本采集：載體植入24小時(shí)后觀察小鼠腹腔載體周圍組織肉眼及HE染色的病理變化；比較兩組小鼠外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)；觀察植入前和植入后24h P.a感染組載體生物被膜活菌計(jì)數(shù)；掃描電子顯微鏡（SEM）觀察植入前生物被膜和P.a感染組24h生物被膜。
　　結(jié)果：成功建立了小鼠腹腔生物被膜感染模型。載體植入24h后，肉眼可觀察到 P.a感染組載體周圍組織可見(jiàn)明顯充血，無(wú)菌載

3、體周圍組織無(wú)炎癥充血改變，只見(jiàn)輕微包裹現(xiàn)象；HE染色載體周圍組織病理觀察， P.a感染組可見(jiàn)大量中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，無(wú)菌載體植入組炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)不明顯；24h后白細(xì)胞計(jì)數(shù) P.a感染組明顯高于無(wú)菌載體植入組（P<0.05）；24h后 P.a感染組載體活菌計(jì)數(shù)顯著高于植入前載體活菌計(jì)數(shù)（P<0.01）；掃描電子顯微鏡（SEM）觀察可見(jiàn) P.a感染組生物被膜植入24h后與植入前載體生物被膜相比明顯增厚。
　　結(jié)論：成功建立小鼠腹腔

4、PVC材料植入物銅綠假單胞菌生物被膜感染模型，表現(xiàn)為外周血白細(xì)胞升高，感染組織可見(jiàn)明顯的中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　第二部分黃芩素對(duì)小鼠腹腔銅綠假單胞菌生物被膜感染的體內(nèi)作用
　　目的：構(gòu)建小鼠 P.a生物被膜腹腔感染模型，探討黃芩素（Baicalein,BCA）對(duì)小鼠腹腔 P.a生物被膜感染的作用。
　　方法：（1）構(gòu)建體外生物被膜：醫(yī)用輸液管為載體，野生型 PAO1為實(shí)驗(yàn)菌株，體外培養(yǎng)形成早期銅綠假單胞菌生物被

5、膜。（2）將14只雌性小鼠隨機(jī)分成空白對(duì)照組（0.5％羧甲基纖維素鈉）和黃芩素組（黃芩素300mg/kg.d+0.5%的羧甲基纖維素鈉）。（3）構(gòu)建小鼠腹腔銅綠假單胞菌BF感染模型：將上述載體植入小鼠腹腔。分別給予BCA+0.5%羧甲基纖維素鈉（CMC）灌胃和等體積0.5%CMC灌胃。（4）標(biāo)本采集：藥物作用24h后心臟取血計(jì)數(shù)各組小鼠白細(xì)胞數(shù)量和CRP、TNF-α、IL-1水平；取出載體進(jìn)行細(xì)菌活菌計(jì)數(shù)（連續(xù)稀釋法）；掃描電子顯微鏡下

6、觀察載體表面BF的形態(tài)變化；腹腔感染組織HE染色，顯微鏡下觀察感染組織病理學(xué)特征。結(jié)果：經(jīng)藥物治療24h后，BCA組外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯低于空白對(duì)照組（P<0.05）；BCA組CRP、TNF-α、IL-1水平顯著低于空白對(duì)照組（P<0.01）；BCA組活菌計(jì)數(shù)顯著少于空白對(duì)照組（P<0.01）；SEM觀察發(fā)現(xiàn)空白對(duì)照組比BCA組載體表面BF形成多而稠厚，見(jiàn)較多細(xì)菌黏附；腹腔感染組織病理學(xué)表現(xiàn)空白對(duì)照組炎癥表現(xiàn)明顯，可見(jiàn)大量中性粒細(xì)胞和淋