葛根素、八肽膽囊收縮素逆轉(zhuǎn)糖尿病性白內(nèi)障形成及其機制初探.pdf

1、該研究建立了糖尿病性大鼠白內(nèi)障動物模型及離體白內(nèi)障模型,首次在整體、器官、細胞及分子水平研究了ONOO<'->在白內(nèi)障發(fā)病過程中的作用,并探討了葛根素與CCK-8的對抗作用及其可能的機制.1證實了糖尿病大鼠晶狀體組織內(nèi)存在ONOO<'->;通過免疫熒光染色、免疫組織化學染色檢測到糖尿病大鼠晶狀體組織和LEC中存在異常NT抗原;Western blot法檢測到糖尿病大鼠晶狀體組織中有過量NT蛋白的表達;FCM檢測到糖尿病大鼠晶狀體組織NT

2、陽性細胞的熒光強度明顯增強以及陽性細胞數(shù)明顯增多.以上實驗從不同角度證實了糖尿病大鼠晶狀體組織和LEC中存在ONOO<'->,ONOO<'->確實介導了晶狀體發(fā)生白內(nèi)障的病理變化和LEC凋亡.2建立了ONOO-體外實驗性白內(nèi)障模型,應(yīng)用ONOO<'->誘導了LEC凋亡;采用外源性O(shè)NOO<'->作用于離體大鼠晶狀體,證實ONOO<'->可體外誘發(fā)大鼠晶狀體白內(nèi)障形成.動態(tài)觀察到實驗組大鼠晶狀體抗氧化能力降低,表現(xiàn)為大鼠晶狀體MDA含量升

3、高,SOD以及Na<'+>K<'+>-ATPase活性降低.采用FCM檢測與DNA片段分析手段在細胞與分子水平首次發(fā)現(xiàn)ONOO<'->可造成LEC凋亡,進一步證實了整體實驗結(jié)果.3證實了糖尿病性白內(nèi)障發(fā)病過程中大鼠晶狀體iNOS生成增多;增多的iNOS誘導NO過量生成,NO氧化物衍生的ONOO-則參與介導糖尿病性白內(nèi)障發(fā)生.4葛根素與CCK-8可逆轉(zhuǎn)大鼠糖尿病性白內(nèi)障的形成;葛根素與CCK-8可減輕大鼠糖尿病性白內(nèi)障晶狀體的病理變化,機

4、制可能與其減輕ONOO<'->對LEC及其他組織的氧化性損傷和加強糖尿病大鼠體內(nèi)清除自由基系統(tǒng)的作用并且降低其晶狀體iNOS基因的表達而減少ONOO<'->生成有關(guān).葛根素與CCK-8能減輕培養(yǎng)的LEC由ONOO<'->介導的細胞凋亡并可能通過影響了Fas/FasL信號轉(zhuǎn)導途徑而減弱了ONOO<'->介導的LEC凋亡.5結(jié)膜下與腹腔注射葛根素的給藥方式都對糖尿病大鼠LEC有保護作用;以上結(jié)果均為首次報道,為進一步揭示氧化應(yīng)激損傷在白內(nèi)障