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文檔簡介
1、目的:從電生理角度觀察葛根素對單個心室肌細(xì)胞動作電位的影響，以及對HEK293細(xì)胞上表達(dá)的KCNQ1(KvLQT1)、KCNQ1/KCNE1(IKs)、KCNJ2(Kir2.1)和KCNJ4(Kir2.3)通道電流的影響，探討葛根素抗心律失常的作用機(jī)制。
方法:急性分離大鼠心臟，使用Langendoff系統(tǒng)經(jīng)主動脈逆向灌流，膠原酶Ⅱ酶解獲得單個心室肌細(xì)胞，采用全細(xì)胞膜片鉗記錄技術(shù)觀察不同濃度(0.01，0.1，1mM)葛根素對
2、大鼠心室肌細(xì)胞動作電位的影響;培養(yǎng)HEK293細(xì)胞，分別用脂質(zhì)體瞬時轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-KCNQ1、pcDNA3.1-KCNQ1與pcDNA3.1-KCNE1、pcDNA3.1-KCNJ2、pcDNA3.1-KCNJ4質(zhì)粒，于24～48h對轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞進(jìn)行全細(xì)胞和內(nèi)膜向外模式電生理記錄，觀察不同濃度(0.1～10mM)葛根素對通道電流的影響。此外，觀察β受體激動劑異丙腎上腺素(100nM)、蛋白激酶A激動劑8-Br-cAMP（100μ
3、M）、腺苷酸環(huán)化酶激動劑Forskolin（10μM）、PI3K通路抑制劑LY294002（10μM）以及PLC信號通路抑制劑U73122(10μM)對1mM葛根素抑制后的KvLQT1通道電流的影響。
結(jié)果:0.01mM、0.1mM、1mM葛根素分別使大鼠心室肌細(xì)胞靜息膜電位從（-80.1±2.7）mV變?yōu)?-78.5±4.2)mV、(-83.3±7.6)mV和（-84.7±5.1)mV（均n=6,P＞0.05）;使動作電位超
4、射幅度從（112.5±6.3）mV變?yōu)椋?09.8±8.5）mV、（114.2±4.9）mV和（115.9±6.2）mV（均n=6，P＞0.05）;使APD90從（164.6±21.4）ms延長至(188.3±11.5)ms、（221.6±25.7）ms和(278.7±38.2)ms(均n=6，P＜0.05);使APD50從（71.8±11.8）ms延長至(86.9±10.7)ms、(100.5±14.1)ms和（123.6±25.4）
5、ms（均n=6，P＜0.05）。當(dāng)葛根素的濃度為0.1μM、1μM、10μM、100μM、1mM和10mM時，對KvLQT1穩(wěn)態(tài)電流密度抑制率分別為（2.35±0.50）％、（5.69±2.88）％、（17.20±2.74）％、（57.71±3.45）％、（72.94±3.77）％和（75.78±2.04）％（均n=6，P＜0.05）;對KvLQT1tail穩(wěn)態(tài)電流密度抑制率分別為（5.21±0.39）％、（8.12±2.37）％、（1
6、5.32±4.75）％、（63.23±2.82）％、（75.97±1.99）％和（80.42±3.90）％(均n=6，P＜0.05);對IKs峰值電流密度的抑制率分別為（3.19±4.11）％、（8.87±3.66）％、（17.81±2.52）％、(40.44±1.90)％、（60.99±3.21）％和(63.18±2.18)％（均n=6，P＜0.05）;對IKstail峰值電流密度的抑制率分別為（4.98±0.45）％、（7.78±1
7、.63）％、(14.32±1.75)％、（45.23±2.82）％、（63.25±2.73）％和（65.42±3.90）％（均n=6，P＜0.05）。當(dāng)葛根素的濃度為10mM、50mM、100mM和200mM時，對Kir2.1穩(wěn)態(tài)電流密度抑制率分別為（28.20±2.80）％、(52.36±1.76)％、（52.42±3.07）％和(53.11±3.81)％(均n=6，P＜0.05);對Kir2.3穩(wěn)態(tài)電流密度抑制率分別為（11.04±
8、2.89）％、（25.89±2.21）％、（38.56±3.39）％和（57.18±4.15）％（均n=6，P＜0.05）。100mM葛根素使標(biāo)準(zhǔn)化后的Kir2.3單通道開放率減小（32.91±4.60）％(n=6，P＜0.05)，通道電導(dǎo)為（14.42±0.14）pS，無顯著性變化;100μM葛根素分別使標(biāo)準(zhǔn)化后的KvLQT1和IKs單通道開放率減?。?9.78±7.65）％和（54.25±8.22）％（均n=6，P＜0.05），通道
9、電導(dǎo)分別為(4.43±1.47)pS和（15.89±3.83）pS，無顯著性變化。異丙腎上腺素(100nM)、8-Br-cAMP（100μM）、Forskolin(10μM)、LY294002（10μM）以及U73122（10μM）對1mM葛根素預(yù)處理的KvLQT1通道電流的抑制率分別為（38.81±6.42）％、（46.89±3.80）％、（56.37±7.97）％、（63.53±4.98）％和（52.34±5.73）％（均n=6，P
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