丁基苯肽減輕糖尿病性白內(nèi)障氧化應(yīng)激損傷及其作用機制的研究.pdf

1、目的:活性氧(Reactive oxygen species，ROS)在糖尿病性白內(nèi)障的發(fā)病機制中發(fā)揮重要作用。丁基苯酞（DL-3-n-butylphthalide，NBP）是一種抗氧化劑，現(xiàn)在是用于治療缺血性腦卒中的藥物。在本實驗研究中，我們旨在探討糖尿病大鼠模型給予口服丁基苯酞后，是否能對模型組大鼠的糖尿病性白內(nèi)障的病變進展有減緩作用，并且內(nèi)源性轉(zhuǎn)錄因子Nrf2和其下游的抗氧化酶之間是否存在關(guān)系。
　　方法:
　　1.選

2、取體重(200±15g)健康雄性6周齡SD大鼠45只，將其隨機分為:(1)正常對照組（C組）:15只大鼠（30只眼）;(2)糖尿病模型組（DM組）:15只大鼠（30只眼）;(3)丁基苯酞給藥組（DM+NBP組）:15只大鼠（30只眼）。
　　2.糖尿病組和丁基苯酞給藥組大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ，60mg/kg)，建立糖尿病模型，而正常對照組大鼠則僅接受注射檸檬酸鈉緩沖液。72小時后取尾尖血測定血糖，以血糖≥16.7 mmol

3、/L，尿糖（+++～++++）作為糖尿病模型成功的標志。
　　3.丁基苯酞溶于植物油中，按照80毫克/公斤體重的劑量通過口服灌胃管飼5天/周。確認造模成功后:(1)正常對照組（C組）:給予等劑量的植物油灌胃;(2)糖尿病模型組（DM組）:給予等劑量的植物油灌胃;(3)丁基苯酞給藥(DM+NBP)組:每日9點左右給予80mg/kg丁基苯酞灌胃。
　　4.樣本采集:糖尿病大鼠模型建成后，每2周測血糖和測定大鼠的體重，不符合標準者

4、棄去。在實驗期間，每3周散瞳觀察大鼠晶狀體混濁情況并分級。12周后處死大鼠，取眼球并且保存用于實驗分析。左眼的晶狀體固定在溶解于0.01mol/lPBS的4％多聚甲醛中，用于組織學和免疫組化檢查。右眼的晶狀體儲存于-80℃中，用于生化分析測量。血樣待取出眼球后從股動脈采取。血清是從EDTA處理的全血樣品中提取的，用于血糖和8-OHdG水平的檢查。氧化應(yīng)激參數(shù)如4-羥基壬烯醛（4-HNE）和MDA也存在于晶狀體中，通過Western印跡和

5、硫代巴比妥酸分析測定。Nrf2及其下游的抗氧化酶catalase通過Western blot和免疫組化測定。
　　5.統(tǒng)計學分析:統(tǒng)計數(shù)據(jù)運用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析，每組數(shù)據(jù)表示為均數(shù)±標準差(Mean±SD)，組間的差異通過采用單因素方差分析方法進行評估，若P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果:
　　1.大鼠的一般狀況:DM和DM+NBP組的血糖水平明顯高于正常對照組(P＜0.05)。DM+NBP給藥

6、組血糖水平顯著降低于糖尿病組(P＜0.05)。而且DM+NBP組大鼠表現(xiàn)出較好的活力，體重正常。
　　2.血清8-OHdG含量的測定:與正常對照組相比，糖尿病組大鼠血清8-OHdG明顯升高(P＜0.05);與糖尿病組相比，丁基苯酞給藥組大鼠血清8-OHdG降低(P＜0.05)。
　　3.晶狀體及病理形態(tài)學觀察:設(shè)定3、6、9、12周的時間點觀察各組白內(nèi)障的病變進展。在實驗期間，正常對照組大鼠晶狀體明顯清亮正常。
　　4

7、.晶狀體MDA、氧化損傷物4-HNE、氧化蛋白的檢測:相較于正常對照組，糖尿病組大鼠三個指標明顯增高（P＜0.05）;而與糖尿病組大鼠相比，丁基苯酞給藥組大鼠三個指標降低(P＜0.05)。
　　5.Nrf2和其下游抗氧化蛋白Catalase水平檢測:通過Western blot檢測，與正常對照組相比糖尿病組大鼠晶狀體的細胞漿和細胞核中Nrf2幾乎檢測不到(P＜0.05)。然而，DM+NBP組大鼠晶狀體細胞漿和細胞核中Nrf2明顯高

8、于DM組(P＜0.05)。為了進一步測定Nrf2，我們進行了免疫組化定位檢測。正常情況下，Nrf2陽性主要表達于晶狀體上皮細胞及纖維細胞的細胞漿和細胞核中，然而糖尿病組大鼠晶狀體的Nrf2在上皮細胞及纖維細胞的胞漿和胞核內(nèi)幾乎不表達，Nrf2在DM+NBP組中比糖尿病組表達增多。在Western blot檢測結(jié)果中，與Nrf2表達結(jié)果相一致，與正常對照組比較，Catalase在糖尿病組大鼠晶狀體細胞漿中的表達顯著降低(P＜0.05);與

9、DM組比較，Catalase在DM+NBP組大鼠晶狀體細胞漿中表達明顯增多(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.氧化應(yīng)激與糖尿病性白內(nèi)障發(fā)病機制有密切的關(guān)系。
　　2.丁基苯酞可以在一定程度上抑制糖尿病大鼠的氧化應(yīng)激反應(yīng)。
　　3.丁基苯酞可以減緩糖尿病性白內(nèi)障的病變進展。
　　4.丁基苯酞可以減輕糖尿病大鼠晶狀體蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的過氧化。
　　5.丁基苯酞通過調(diào)控Nrf2和其下游的抗氧化劑Catala