超敏蛋白對(duì)煙草蝕紋病毒的防治研究.pdf

1、煙草蝕紋病毒(Tobacco Etch Virus，TEV)屬于馬鈴薯Y病毒屬（Potyvirus），最早發(fā)現(xiàn)于1930年的美國(guó)肯塔基州，隨后加拿大的部分煙區(qū)也發(fā)現(xiàn)了該病毒，逐漸發(fā)展成為一種世界性的病毒病。煙草蝕紋病毒主要通過(guò)蚜蟲(chóng)的非持久性傳播，也可以通過(guò)種傳和機(jī)械傳播。煙草蝕紋病毒因病毒株系、寄主種類(lèi)和長(zhǎng)勢(shì)不同所表現(xiàn)的癥狀稍有不同。一般來(lái)說(shuō)，植株開(kāi)始發(fā)病初期是小斑點(diǎn)，隨著斑點(diǎn)數(shù)量的增多，出現(xiàn)線型的壞死組織和斑駁，并沿著葉脈發(fā)展，發(fā)病嚴(yán)

2、重時(shí)病斑布滿(mǎn)整個(gè)葉片，到發(fā)病后期病組織會(huì)干枯脫落，只留下焦枯的葉脈。近年來(lái)，煙草蝕紋病毒已成為繼黃瓜花葉病毒(CMV)、煙草普通花葉病毒(TMV)、馬鈴薯Y病毒(PVY)等危害煙葉生產(chǎn)品質(zhì)的第四大病毒病，在我國(guó)各大煙區(qū)普遍發(fā)生。煙草蝕紋病毒在陜西煙田的發(fā)病率一般在10％左右，近年來(lái)有逐年上升的趨勢(shì)。
　　前期本實(shí)驗(yàn)室從秦嶺植物根際土壤中篩選得到一株對(duì)多種病原菌具有顯著抗性的解淀粉芽孢桿菌Ba-168。結(jié)合前人對(duì)芽孢桿菌屬的研究，本

3、實(shí)驗(yàn)以解淀粉芽孢桿菌Ba-168為出發(fā)點(diǎn)，通過(guò)過(guò)濾離心、硫酸銨分級(jí)沉淀、陰離子交換層析等多種蛋白質(zhì)分離純化方法對(duì)解淀粉芽孢桿菌Ba-168的發(fā)酵液進(jìn)行提純分離，結(jié)合生物活性測(cè)定和過(guò)敏性壞死反應(yīng)發(fā)現(xiàn)能夠誘導(dǎo)煙草系統(tǒng)抗病性的超敏蛋白JDF-d的分子量在25-30 kDa之間。
　　為明確解淀粉芽孢桿菌發(fā)酵液中超敏蛋白JDF-d對(duì)煙草蝕紋病毒的誘導(dǎo)抗性。本實(shí)驗(yàn)以三生煙和普通煙NC89為實(shí)驗(yàn)材料，測(cè)定100，300，500，800μg/m

4、L的超敏蛋白JDF-d對(duì)煙草蝕紋病毒的誘導(dǎo)抗性效果，試驗(yàn)結(jié)果表明不同濃度的超敏蛋白JDF-d粗蛋白提取液都能夠不同程度的提高煙草對(duì)煙草蝕紋病毒的抑制效果，誘抗效果隨著超敏蛋白濃度的增加而提高。采用300μg/mL的超敏蛋白JDF-d粗蛋白提取液進(jìn)行對(duì)煙草蝕紋病毒的鈍化試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:超敏蛋白JDF-d對(duì)煙草蝕紋病毒的體外鈍化效果不明顯，說(shuō)明超敏蛋白JDF-d本身不具備對(duì)病毒粒子的抑制效果。隨后測(cè)定了300μg/mL超敏蛋白JDF-d

5、粗蛋白提取液對(duì)煙草的保護(hù)作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn):對(duì)煙草噴施300μg/mL超敏蛋白JDF-d粗蛋白提取液24小時(shí)和48小時(shí)后接種煙草蝕紋病毒的煙葉枯斑數(shù)較對(duì)照大幅度減少，枯斑抑制率分別達(dá)到67.08％和71.33％。在超敏蛋白JDF-d激發(fā)子的作用下，煙草葉片的SOD、PAL、POD三種防御酶主要表現(xiàn)為在一定時(shí)間內(nèi)酶活性升高，達(dá)到最高點(diǎn)后酶活性開(kāi)始下降，酶活性均高于對(duì)照組。
　　解淀粉芽孢桿菌在自身生長(zhǎng)過(guò)程中分泌的多種次生代謝產(chǎn)物，這些產(chǎn)

6、物能夠?qū)Χ喾N病原菌具有顯著的抑制作用，并對(duì)植物自身起到促生的作用，具有廣闊的發(fā)展和應(yīng)用前景。但由于此類(lèi)物質(zhì)成分在5％綿羊血瓊脂平板上產(chǎn)生溶血現(xiàn)象，限制了解淀粉芽孢桿菌的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)，并對(duì)該菌株的安全性帶來(lái)隱患。用物理和化學(xué)誘變方法對(duì)解淀粉芽孢桿菌Ba-168進(jìn)行誘變，通過(guò)血瓊脂平板對(duì)突變菌株篩選出6株溶血性缺失的突變菌株。通過(guò)此次試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)解淀粉芽孢桿菌對(duì)紫外誘變更為敏感，致死率更高，誘變結(jié)果更為理想。在試驗(yàn)中，紫外燈功率40W，樣品與紫外