實驗四乳粉中蛋白質的檢測

1、實驗四：乳粉中蛋白質的檢測實驗四：乳粉中蛋白質的檢測一、實驗目的：一、實驗目的：掌握凱氏定氮法測牛乳中蛋白質的原理與方法。二、實驗原理：二、實驗原理：蛋白質是含氮的有機化合物。食品與硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質分解，分解的氨與硫酸結合生成硫酸銨。然后堿化蒸餾使氨游離，用硼酸吸收后，再以硫酸或鹽酸標準溶液滴定，根據酸的消耗量乘以換算系數(shù)，即為蛋白質的含量。（1）消化試樣與濃硫酸和催化劑一同加熱，使有機質破壞，蛋白質分解，其中碳和氫完

2、全被硫酸的分解物氧化為二氧化碳和水逸去，而氨則與硫酸結合生成硫酸銨，存在溶液中：消化時加入硫酸銅，是作催化劑，以加速分解反應：2244242224242222SOOHCuSOSOHSOCuCOSOSOCuCuSOC??????????有機物消化完后，溶液具有清澈的硫酸銅的藍綠色，同時硫酸銅在下一步蒸餾時可作堿性反應的指示劑。加入硫酸鉀，是為了提高溶液沸點，加速分解這一過程：224244424222SOOHSOKKHSOKHSOSOHSO

3、K?????在消化過程中，隨著硫酸的不斷分解，水分的不斷蒸發(fā)，硫酸鉀的濃度逐漸增大，沸點升高，加速了對有機物的分解作用。加入過氧化氫，是利用其氧化性，以加快反應速度：4244232223222222222422222SONHSOHNHOHSOCONHCOOHRCHNHOHOHCOOCOOHSOSOH）（＋，，，蛋白質（過量）濃硫酸????????????????????OHOOH2222＋加熱????四、操作方法：四、操作方法：（1）樣

4、品的稱取精密稱取020~200g固體樣品或200~500g半固體樣品或吸取1000~2500mL（或用減量法稱取12~15g）液體樣品約相當于氮30~40mg，將樣品和濾紙一起小心移入凱氏燒瓶的球部；液體樣品要用減量法于凱氏燒瓶中，傾倒樣品時要順著連燒杯一起稱重的小玻璃棒小心操作，盡量使樣品不掛在凱氏燒瓶的頸口部。（2）消化在凱氏燒瓶中加入10g硫酸鉀和1g硫酸銅，量取20mL濃硫酸，徐徐加入到凱氏燒瓶中，混合，置于有石棉網的電爐上傾斜

5、加熱（通風櫥內進行）。一開始火要小，小心燒瓶內泡沫沖出而影響測定結果。當瓶內發(fā)泡停止，再加大火力，同時，分數(shù)次加入10mL過氧化氫溶液（加前須燒瓶冷卻一會兒），沖下瓶頸和瓶壁上的炭化粒。當燒瓶內容物的顏色逐漸變成透明的淡綠色時，繼續(xù)消化0.5~1h。（3）轉移使消化好的樣品稍冷，沿瓶壁吹入少許水，混合，再逐漸沿瓶壁吹入少許水（防止劇烈沸騰，水迸出燒瓶）至燒瓶內液體的體積約60mL，沿玻璃棒將燒瓶壁內的液體倒入放有小漏斗的100mL容量瓶