腫瘤壞死因子α基因啟動(dòng)子多態(tài)性與沙利度胺治療多發(fā)性骨髓瘤關(guān)系的研究.pdf

1、多發(fā)性骨髓瘤(multiplemyeloma，MM)是漿細(xì)胞惡性增殖性疾病。一些細(xì)胞因子異常，可影響正常B細(xì)胞激活、發(fā)育和分化，對(duì)MM發(fā)生、發(fā)展均起到關(guān)鍵性作用，其中TNF-α是研究的比較充分的細(xì)胞因子之一。MM患者外周血TNF-α水平明顯升高，經(jīng)抗TNF-α治療，MM得到有效控制，進(jìn)一步支持TNF-α對(duì)MM發(fā)生、發(fā)展的重要作用。TNF-α表達(dá)在轉(zhuǎn)錄水平受到調(diào)控，TNF-α基因啟動(dòng)區(qū)多態(tài)性在TNF-α生成中起基因調(diào)控作用。迄今為止，人們

2、針對(duì)不同種族、疾病類型，采用多種方法研究TNF-α基因多態(tài)性與TNF-α表達(dá)的關(guān)系，尤其是對(duì)TNF-α基因啟動(dòng)區(qū)-308、-230位點(diǎn)多態(tài)性的研究成為近幾年的熱點(diǎn)，但研究結(jié)果并不一致，考慮與不同種族、疾病有關(guān)。沙利度胺(ThalidomidaThal)，因具有抗血管生成、抗TNF-α及免疫調(diào)節(jié)等作用，廣泛用于MM治療，并取得較好療效。因Thal有一定的副作用，不同個(gè)體對(duì)其反應(yīng)不同，應(yīng)嚴(yán)格掌握用藥指征，故有必要研究Thal治療MM的療效與

3、F-α基因表達(dá)的關(guān)系，以期指導(dǎo)個(gè)體化治療。為明確中國漢族人MM患者TNF-α基因啟動(dòng)區(qū)-308、-238位點(diǎn)多態(tài)性及其與MM易感性的關(guān)系，該文采用SSP-PCR(sequencespecificprimer-PCR)方法檢測(cè)中國漢族MM患者與健康對(duì)照者TNF-α-308、-238位點(diǎn)等位基因頻率，雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(EnzymeLinkedImmunosorbentAssayELISA)，按照試劑盒說明，測(cè)定外周血TNF-α水平。

4、 目的 檢測(cè)TNF-α基因啟動(dòng)區(qū)-308、-238位點(diǎn)等位基因頻率，測(cè)定健康人、MM患者血漿TNF-α水平，探討TNF-α基因啟動(dòng)區(qū)-308、-238位點(diǎn)多態(tài)性與多發(fā)性骨髓瘤(MM)易感性的關(guān)系及其與沙利度胺治療多發(fā)性骨髓瘤療效的相關(guān)性。 方法 (1)抽取MM患者、健康對(duì)照者5ml枸櫞酸鈉抗凝靜脈血，以淋巴細(xì)胞分離液分離單個(gè)核細(xì)胞后，以DNA-ZOL按說明書要求提取基因組DNA，溶于無菌蒸餾水中，紫外分光

5、光度法測(cè)定DNA濃度、純度，提取物現(xiàn)用或-20℃冰箱保存；健康人、MM患者血漿用EDTA抗凝，在搜集后30分鐘內(nèi)使用，或儲(chǔ)存在-80℃冰箱直至使用。 (2)將Thal治療的MM患者分為治療有效組、無效組，所有病例均于治療前留取血漿標(biāo)本，治療有效組在最大反應(yīng)率時(shí)留取標(biāo)本，治療無效組在治療結(jié)束后留取標(biāo)本，ELISA方法檢測(cè)健康人、MM患者血漿TNF-α水平測(cè)定治療前后血漿TNF-α水平， (3)SSP-PCR方法檢測(cè)56例難

6、治、復(fù)發(fā)中國漢族MM患者、114名健康中國漢族人TNF-α啟動(dòng)區(qū)-308、-238位點(diǎn)等位基因A/G頻率，3％瓊脂糖凝膠電泳檢查PCR產(chǎn)物，PCR產(chǎn)物純化后克隆測(cè)序。 結(jié)果 (1)SSP-PCR擴(kuò)增片段的長度為110bp，位于TNF-α啟動(dòng)區(qū)，4對(duì)引物擴(kuò)增產(chǎn)物的測(cè)序結(jié)果均為我們的目的條帶，即-308、-238位點(diǎn)堿基分別為G、G，A、G，G、A，A、A。56例難治、復(fù)發(fā)中國漢族MM患者、114名健康中國漢族人-238位點(diǎn)

7、等位基因A/G頻率分別為：17/112，15.18％；36/228，15.79％，兩組間無明顯差異(P=0.884)；MM組、對(duì)照組-308位點(diǎn)等位基因A頻率分別為2/112，1.79％；21/228，9.21％，兩組間有顯著差異(P=0.010)，MM組明顯低于對(duì)照組。 (2)測(cè)定的31例難治復(fù)發(fā)MM患者、9例健康人血漿TNF-α濃度，分別是(79.11±72.0346pg/ml；12.02±3.6570pg/ml，P＜0.0

8、500)，MM患者與健康對(duì)照組血漿TNF-α水平有明顯差異，患者明顯高于健康人。 (3)反應(yīng)停治療有效組、無效組TNF-α基因啟動(dòng)區(qū)-238位點(diǎn)A/G頻率分別為：5/4610.86％；2/1612.5％P=0.8591，兩組間無明顯差異；-238位點(diǎn).為A(n=7)與為G(n=24)的患者血漿TNF-α水平分別為(64.6851±71.0250pg/ml；112.1501±161.0436pg/mlP=0.5690)兩組間無明顯

9、差異，所測(cè)31份患者標(biāo)本-308位點(diǎn)均為G。 (4)Thal治療無效組，治療前后血漿TNF-α水平，分別是(54.0688±6.4732pg/ml；54.4672±3.3512pg/ml，P=0.8731)，兩者無明顯差異；反應(yīng)停治療有效組，治療前后血漿TNE-α水平分別是(55.2854±11.3558pg/ml；29.2842±11.5684pg/ml，P=0.0001)，治療后TNF-α水平明顯降低。 結(jié)論

10、 (1)在所研究的人群中未發(fā)現(xiàn)TNF-α基因啟動(dòng)子-238位點(diǎn)多態(tài)性與MM易感性相關(guān)，但MM患者TNF-α基因啟動(dòng)區(qū)-308位點(diǎn)A的頻率明顯低于對(duì)照組，推測(cè)TNF--α基因啟動(dòng)區(qū)-308位點(diǎn)堿基為A是保護(hù)性因素。 (2)MM患者TNF-α水平明顯高于健康人。 (3)Thal治療有效組與無效組-238、-308位點(diǎn)基因型無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，-238、-308位點(diǎn)等位基因A/G頻率與血漿TNF-α水平無明顯差異，未顯示出TNF-α