促紅細(xì)胞生成素及其受體在蕈樣肉芽腫患者皮損中的表達(dá).pdf

1、促紅細(xì)胞生成素(Epo)的基本功能是促進(jìn)紅系祖細(xì)胞增生和分化，Epo與其受體(EpoR)結(jié)合發(fā)揮作用。近些年的研究發(fā)現(xiàn)Ep0R除在紅系祖細(xì)胞表達(dá)外，還可在多種非造血組織中表達(dá)，這表明Epo的作用并不局限于造血組織，因此Epo是很可能一種作用廣泛和多效的細(xì)胞因子。近來的研究發(fā)現(xiàn)Epo和EpoR在多種類型的惡性腫瘤細(xì)胞及其來源的細(xì)胞系表達(dá)，并發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤內(nèi)存在的自分泌或旁分泌Epo-EpoR信號(hào)與惡性腫瘤的生物學(xué)行為改變有關(guān)，如促進(jìn)腫瘤細(xì)胞

2、增殖、抑制腫瘤細(xì)胞凋亡和降低腫瘤細(xì)胞對(duì)放化療的敏感性。 目的: 目前對(duì)Epo和EpoR在蕈樣肉芽腫(MF)患者皮損中淋巴細(xì)胞的表達(dá)國內(nèi)外尚未有研究報(bào)道，本文擬采用免疫組化方法(S—P法)對(duì)MF患者皮損中淋巴細(xì)胞Epo及EpoR的表達(dá)情況進(jìn)行初步研究。 方法: 一、臨床標(biāo)本的選擇 選取MF和炎癥性皮膚病(ID)病例活檢標(biāo)本，MF組16例，包括早期(斑片或斑塊期)12例和腫瘤期4例；ID組15例，包括

3、銀屑病6例、濕疹4例和扁平苔蘚5例。所有入選病例均由3位皮膚病理醫(yī)生閱讀HE染色切片后明確診斷。入選患者均無明顯心、腦、肝及腎等臟器病變和外周血異常，兩組病例在年齡和性別構(gòu)成比方面具有可比性。 二、免疫組化方法(S—P法) 將入選標(biāo)本蠟塊切成5μm厚切片，經(jīng)過二甲苯和梯度酒精脫蠟后在PH值為6.0的檸檬酸緩沖液中進(jìn)行抗原修復(fù)，然后用3％H<,2>O<,2>溶液孵育以消除內(nèi)源性過氧化物酶活性，準(zhǔn)備染色。主要試劑為：Epo抗

4、體、EpoR抗體、免疫組化染色試劑盒和顯色劑。DAB按照用法指導(dǎo)操作。免疫組化染色后用蘇木素復(fù)染，塑膠封片待觀察。 三、免疫組化染色對(duì)照 以侵襲性惡性黑素瘤標(biāo)本作為陽性對(duì)照，以PBS代替Epo和EpoR抗體作為陰性對(duì)照。 四、結(jié)果判定使用共覽顯微鏡(Olympus BX50)觀察HE切片及免疫組化染色結(jié)果 1、判定標(biāo)準(zhǔn) Epo染色標(biāo)本，細(xì)胞胞漿表達(dá)為陽性；EpoR染色標(biāo)本，細(xì)胞胞漿或胞膜表達(dá)均為陽

5、性。 2、評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 采用盲法，由3位病理醫(yī)生對(duì)2組免疫組化染色切片進(jìn)行半定量評(píng)分。淋巴細(xì)胞無著色記為0分，胞漿局部細(xì)小顆粒著色視為輕度表達(dá)并記為1分，胞漿中等細(xì)小顆粒著色或局部粗大顆粒著色視為中度表達(dá)并記為2分，胞漿彌漫性細(xì)小顆粒著色或明顯粗大顆粒著色視為強(qiáng)表達(dá)并記為3分。每個(gè)視野(×100)的淋巴細(xì)胞染色積分=1×輕度表達(dá)％+2×中度表達(dá)％+3×強(qiáng)表達(dá)％，每張切片隨機(jī)選取3個(gè)視野，取其平均值為其積分。 五、統(tǒng)計(jì)