不同劑量Rho激酶抑制劑對(duì)缺血再灌注大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的:心肌再灌注治療挽救缺血心肌的同時(shí),心肌恢復(fù)血流可能加重缺血造成的損傷,即引起缺血再灌注損傷(myocardial ischemia reperfusioniniury,MIRI)。近年來(lái)研究表明,心肌細(xì)胞凋亡也是心肌細(xì)胞的一種重要的死亡形式,在MIRI病理生理過(guò)程中發(fā)揮著重要作用,與梗死灶的發(fā)展有關(guān)。Rho激酶介導(dǎo)了細(xì)胞凋亡。
　　 本研究通過(guò)建立大鼠心肌缺血再灌注模型,觀察缺血再灌注大鼠心肌細(xì)胞凋亡及Bcl.2和Bax表

2、達(dá)的情況,以評(píng)價(jià)不同劑量Rho激酶抑制劑(法舒地爾Fasudil)對(duì)大鼠I/R后心肌的保護(hù)作用。
　　 方法:健康雄性Spingue Dawley(SD)大鼠,普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,隨機(jī)分為5組,即假手術(shù)組(Sham):大鼠開胸暴露左冠狀動(dòng)脈,穿線但不作結(jié)扎,于穿線30分鐘后腹腔內(nèi)注射生理鹽水0.5ml,觀察165分鐘；缺血再灌注組(ischemia reperfusion,I/R):收緊結(jié)扎線阻斷冠狀動(dòng)脈左前降支缺血45分

3、鐘,于再灌注前15分鐘腹腔內(nèi)注射生理鹽水0.5ml,放松結(jié)扎線再灌注120分鐘；法舒地爾大劑量治療組(HDF):收緊結(jié)扎線阻斷冠狀動(dòng)脈左前降支缺血45分鐘,于再灌注前15分鐘腹腔內(nèi)給予法舒地爾(30mg/kg),放松結(jié)扎線再灌注120分鐘；法舒地爾中劑量治療組(IDF):收緊結(jié)扎線阻斷冠狀動(dòng)脈左前降支缺血45分鐘,于再灌注前15分鐘腹腔內(nèi)注射法舒地爾(10mg/kg),放松結(jié)扎線再灌注120分鐘；法舒地爾小劑量治療組(I,DF):收緊結(jié)

4、扎線阻斷冠狀動(dòng)脈左前降支缺血45分鐘,于再灌注前15分鐘腹腔內(nèi)注射法舒地爾(5mg/kg),放松結(jié)扎線再灌注120分鐘；再灌注120分鐘后再次阻斷冠狀動(dòng)脈血流,伊文藍(lán).紅四氮唑雙染色,常規(guī)HE染色,TUNEL法檢測(cè)缺血區(qū)凋亡細(xì)胞,免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)缺血區(qū)Bcl-2和Bax的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1心肌組織形態(tài)學(xué)變化
　　 假手術(shù)組大鼠心肌纖維排列規(guī)則,結(jié)構(gòu)清晰,細(xì)胞核呈橢圓型,心肌細(xì)胞之間間隙緊密,細(xì)胞

5、形態(tài)學(xué)表現(xiàn)基本正常；I/R組可見大量心肌細(xì)胞變性、心肌組織水腫,病理改變程度較HDF組、IDF組及LDF組大鼠的明顯加重；HDF組較IDF組及LDF大鼠心肌病理改變程度輕；IDF組大鼠心肌病理改變程度與LDF組相當(dāng)。
　　 2心肌細(xì)胞凋亡情況
　　 與Sham組相比,I/R組、LDF組、IDF組及HDF組缺血區(qū)心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)均顯著升高,且差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與I/R組相比,LDF組、IDF組及HDF組心肌

6、細(xì)胞凋亡指數(shù)均顯著降低,且差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；HDF組與IDF組、LDF組比較心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著降低,差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；IDF組和LDF組比較心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)無(wú)明顯差異,差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 3 Bcl-2基因蛋白的表達(dá)情況
　　 與Sham組相比,I/R組、LDF組、IDF組及HDF組缺血區(qū)心肌細(xì)胞Bcl-2蛋白的表達(dá)均顯著降低,且差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；

7、與I/R組相比,LDF組、IDF組及HDF組Bcl-2蛋白的表達(dá)均顯著升高,且差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；HDF組與IDF組、LDF組比較Bcl-2蛋白的表達(dá)顯著升高,差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；IDF組和LDF組比較Bcl-2蛋白的表達(dá)無(wú)明顯差異,差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 4 Bax基因蛋白的表達(dá)情況
　　 與Sham組相比,I/R組、LDF組、IDF組缺血區(qū)心肌細(xì)胞Bax蛋白的表達(dá)均顯著

8、升高,且差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與Sham組相比,HDF組缺血區(qū)心肌細(xì)胞Bax蛋白的表達(dá)也顯著升高(P<0.05)；與I/R組相比,LDF組、IDF組及HDF組Bax蛋白的表達(dá)均顯著降低,且差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；HDF組和IDF組、LDF組比較Bax蛋白的表達(dá)均顯著降低,差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；IDF組和LDF組比較Bax蛋白的表達(dá)無(wú)明顯差異,差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 結(jié)論:本研