微淋巴管在膽管癌轉(zhuǎn)移中的作用.pdf

1、該課題正是基于膽管癌主要通過(guò)淋巴轉(zhuǎn)移的特點(diǎn),在研究膽管癌微淋巴管狀況的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步通過(guò)體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)觀察腫瘤組織的淋巴管生成情況,并利用微淋巴管對(duì)活性染料的吸收作用,研究荷瘤裸鼠肝門部膽管原位膽管癌種植瘤淋巴引流特點(diǎn),以期指導(dǎo)臨床膽管癌手術(shù)治療.該課題主要采用了CD31/Ⅳ型膠原免疫組化雙重染色、5′-核苷酸酶染色及透視電鏡技術(shù)對(duì)膽管癌淋巴管分布、數(shù)量及結(jié)構(gòu)特點(diǎn)進(jìn)行觀察.免疫組化SP法分別檢驗(yàn)VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3

2、和Ki-67的表達(dá)及分布.而RT-PCR及Western Blotting被分別用于檢測(cè)VEGF-C mRNA及蛋白的表達(dá).研究結(jié)果表明:1.膽管癌癌旁淋巴管具有管腔大,管壁薄,基底膜缺乏或不連續(xù),細(xì)胞間連接趨向簡(jiǎn)單的特點(diǎn),而在毛細(xì)淋巴管周圍及管腔內(nèi)癌細(xì)胞浸潤(rùn)征象,提示癌旁毛細(xì)淋巴管可能是膽管癌發(fā)生轉(zhuǎn)移的重要途徑.2.多項(xiàng)結(jié)果支持膽管癌存在有淋巴管生成.直接的證據(jù)來(lái)自:膽管癌組織癌旁淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞增殖標(biāo)志物陽(yáng)性染色;癌旁淋巴管密度顯著高

3、于良性膽道病變及癌旁正常組織.而促淋巴管生成因子VEGF-C在膽管癌組織的高表達(dá)及其與癌旁微淋巴官密度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性有力地說(shuō)明了膽管癌可能存在有淋巴管生成.3.不同侵襲能力的膽管癌細(xì)胞亞群體外培養(yǎng)或成纖維細(xì)胞混合培養(yǎng)其促淋巴管生成因子VEGF-C表達(dá)上無(wú)顯著差異表明:膽管癌細(xì)胞株在體外培養(yǎng)過(guò)程中,寬松的環(huán)境條件,并不能誘導(dǎo)其促淋巴管生成潛能的表現(xiàn).提示體外細(xì)胞株形成的種植瘤在獲得淋巴管生成能力的過(guò)程中需要VEGF-C表達(dá)量的積累或

4、前體蛋白的進(jìn)一步修飾等調(diào)節(jié)過(guò)程.這也可能是體外腫瘤細(xì)胞株體內(nèi)種植后早期轉(zhuǎn)移能力低下的原因之一.4.膽管癌細(xì)胞株經(jīng)體內(nèi)反復(fù)成瘤篩選得到的種植瘤,其VEGF-C表達(dá)顯著上調(diào),伴隨瘤周淋巴管密度的顯著增加.下調(diào)其VEGF-C表達(dá),能顯著降低瘤周微淋巴管密度.提示膽管癌裸鼠種植瘤能誘導(dǎo)淋巴管生成.5.對(duì)裸鼠肝門部膽管原位種植癌的淋巴引流特點(diǎn)的研究提示,業(yè)已存在的肝門部集合淋巴管是微淋巴管建立回流的主要通道.腫瘤新生淋巴管可能會(huì)通過(guò)新的回路方式建