微淋巴管在膽管癌轉移中的作用.pdf

1、該課題正是基于膽管癌主要通過淋巴轉移的特點,在研究膽管癌微淋巴管狀況的基礎上,進一步通過體內和體外實驗觀察腫瘤組織的淋巴管生成情況,并利用微淋巴管對活性染料的吸收作用,研究荷瘤裸鼠肝門部膽管原位膽管癌種植瘤淋巴引流特點,以期指導臨床膽管癌手術治療.該課題主要采用了CD31/Ⅳ型膠原免疫組化雙重染色、5′-核苷酸酶染色及透視電鏡技術對膽管癌淋巴管分布、數(shù)量及結構特點進行觀察.免疫組化SP法分別檢驗VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3

2、和Ki-67的表達及分布.而RT-PCR及Western Blotting被分別用于檢測VEGF-C mRNA及蛋白的表達.研究結果表明:1.膽管癌癌旁淋巴管具有管腔大,管壁薄,基底膜缺乏或不連續(xù),細胞間連接趨向簡單的特點,而在毛細淋巴管周圍及管腔內癌細胞浸潤征象,提示癌旁毛細淋巴管可能是膽管癌發(fā)生轉移的重要途徑.2.多項結果支持膽管癌存在有淋巴管生成.直接的證據(jù)來自:膽管癌組織癌旁淋巴管內皮細胞增殖標志物陽性染色;癌旁淋巴管密度顯著高

3、于良性膽道病變及癌旁正常組織.而促淋巴管生成因子VEGF-C在膽管癌組織的高表達及其與癌旁微淋巴官密度、淋巴結轉移的相關性有力地說明了膽管癌可能存在有淋巴管生成.3.不同侵襲能力的膽管癌細胞亞群體外培養(yǎng)或成纖維細胞混合培養(yǎng)其促淋巴管生成因子VEGF-C表達上無顯著差異表明:膽管癌細胞株在體外培養(yǎng)過程中,寬松的環(huán)境條件,并不能誘導其促淋巴管生成潛能的表現(xiàn).提示體外細胞株形成的種植瘤在獲得淋巴管生成能力的過程中需要VEGF-C表達量的積累或

4、前體蛋白的進一步修飾等調節(jié)過程.這也可能是體外腫瘤細胞株體內種植后早期轉移能力低下的原因之一.4.膽管癌細胞株經(jīng)體內反復成瘤篩選得到的種植瘤,其VEGF-C表達顯著上調,伴隨瘤周淋巴管密度的顯著增加.下調其VEGF-C表達,能顯著降低瘤周微淋巴管密度.提示膽管癌裸鼠種植瘤能誘導淋巴管生成.5.對裸鼠肝門部膽管原位種植癌的淋巴引流特點的研究提示,業(yè)已存在的肝門部集合淋巴管是微淋巴管建立回流的主要通道.腫瘤新生淋巴管可能會通過新的回路方式建