血漿microRNA在膽管癌診斷中的作用研究.pdf

1、膽管癌（Cholangiocarcinoma，CCA）是一種起源于膽管上皮細(xì)胞分化而來的惡性度極高的腫瘤，起病隱匿，在有非典型癥狀出現(xiàn)時(shí)一般已到疾病的中晚期，而在此期得到診治的死亡率是早期階段的6.78倍。糖蛋白抗原19-9（Carbohydrate antigen19-9，CA19-9）作為診斷膽管癌的常用血清學(xué)診斷指標(biāo)，但其組織特異性和靈敏度度欠佳，故而有必要尋找新的生物學(xué)標(biāo)記物來提高早期診斷率。近期循環(huán)微小RNA（microRNA

2、，miRNA）成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)，其可以穩(wěn)定存在于循環(huán)血中，另外，其有較高的診斷準(zhǔn)確性、特異性和靈敏性，且不同的疾病所表達(dá)的miRNA譜不同，這些特點(diǎn)均優(yōu)于目前的循環(huán)血標(biāo)志物。但相比于組織miRNA，循環(huán)血miRNA的研究仍相對較少。本文旨在比較18種候選血漿miRNAs在膽管癌和健康對照中的表達(dá)情況，篩選有表達(dá)差異的 miRNA，檢驗(yàn)其診斷效能，并進(jìn)一步分析與臨床特征之間的關(guān)系。
　　目的：比較18種候選血漿miRNAs在膽管癌

3、和健康對照中的表達(dá)情況，并分析與臨床特征之間的關(guān)系。
　　方法：⑴從河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院收集16例膽管癌患者和14例健康對照的新鮮靜脈血，分離出血漿用于本實(shí)驗(yàn)研究。⑵通過反轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（Reverse transcription-quantita-tive polymerase chain rection，RT-qPCR）的檢測方法，檢測18種候選血漿miRNAs在膽管癌和健康對照中的表達(dá)情況。⑶應(yīng)用受試者工作特征曲線

4、（Receiver operating characteristic curve， ROC）分析差異表達(dá)的單一miRNA和3個(gè)miRNA的聯(lián)合模型3-miRNA Panel的診斷價(jià)值。
　　結(jié)果：①膽管癌患者和健康對照組平均年齡、性別比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；②RT-qPCR結(jié)果顯示，與正常對照相比，18種候選血漿miRNA在膽管癌中表達(dá)有上升趨勢的有5種，分別是miR-21-5p，-25-3p，-26a-5p，-

5、374a-5p和miR-92a-3p，其中miR-92a-3p（0.1809±0.4347 vs.0.0654±0.1165，P<0.05）存在顯著性表達(dá)差異，余無顯著性差異（P>0.05）。表達(dá)有下降趨勢的有13種，分別是miR-16-1-3p，let-7a-5p，-7b-5p，-7c-5p，-7f-5p，miR-494-3p，-124-3p，-150-5p，-320a，-326，-373-3p，-204-5p和 miR-186-5p

6、，其中 miR-204-5p和 miR-186-5p的表達(dá)分別為（0.0028±0.0108 vs.0.0102±0.0246，0.0026±0.0086 vs.0.0066±0.0072）有顯著性表達(dá)差異（P<0.05），余無顯著性差異（P>0.05）；③表達(dá)差異顯著的miRNA中，miR-204-5p在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時(shí)較無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移表達(dá)降低（0.0098±0.0174 vs.0.0010±0.0022，P<0.05），與余其他膽管癌的

7、臨床病例特征無明顯關(guān)系（P>0.05）。miR-92a-3p和miR-186-5p與膽管癌的臨床病例特征均無明顯關(guān)系（P>0.05）。④表達(dá)無明顯差異的miRNA中，相比于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時(shí)，let-7b-5p在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中表達(dá)進(jìn)一步降低（0.0022±0.0138 vs.0.0163±0.0186，P<0.05）。與低的TNM分期（Ⅰ/Ⅱ）相比，miR-494-3p在高的TNM分期（Ⅲ/Ⅳ）表達(dá)降低（0.0600±0.0832 vs.0.

8、0095±0.0021，P<0.05）。與高分化相比，miR-373-3p在低分化時(shí)表達(dá)降低（0.0017±0.0179 vs.0.0003±0.0006，P<0.05）；⑤有差異表達(dá)的3種miRNA單一的AUC范圍為：0.708~0.750，95CI％范圍為：0.524~0.924，3種miRNA聯(lián)合的3-miRNA Panel診斷準(zhǔn)確性為（AUC，0.879；95CI%，0.749~1.010；P<0.001）。
　　結(jié)論：⑴