乳清蛋白源降膽固醇活性肽的制備及其生物學(xué)功能的研究.pdf

1、本研究選用乳清蛋白為原料蛋白制備具有降血液膽固醇效應(yīng)的食品蛋白源生物活性肽，以乳清蛋白水解度為參照指標(biāo)對(duì)乳清蛋白在胰蛋白酶和A.S1398中性蛋白酶單一或聯(lián)合作用下的5種酶解方式的酶解條件進(jìn)行優(yōu)化。在此基礎(chǔ)上，以豬肝臟中HMG-CoA還原酶活性變化的體外檢測(cè)作為主要的選擇方法，對(duì)產(chǎn)生乳清蛋白源降膽固醇活生物活性肽的酶解方式及酶解條件進(jìn)行篩選，并對(duì)有較高HMG-CoA還原酶抑制活性的乳清蛋白源生物活性肽進(jìn)行了分離及分子量范圍的定性。選用小

2、白鼠飼養(yǎng)試驗(yàn)對(duì)分離所得的乳清蛋白源活性肽的生物學(xué)功能進(jìn)行評(píng)價(jià)。 1.為了獲得產(chǎn)生具有較高HMG-CoA還原酶抑制活性乳清蛋白源生物活性肽的酶解方式及酶解條件，首先以中心組合實(shí)驗(yàn)、正交實(shí)驗(yàn)、單因素實(shí)驗(yàn)等實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法優(yōu)化了乳清蛋白在5種水解方式下的水解條件，然后測(cè)定了每種水解方式下不同水解階段的水解產(chǎn)物體外對(duì)HMG-CoA還原酶活性的影響。結(jié)果表明：先加胰蛋白酶后加A.S1398中性蛋白酶聯(lián)合水解乳清蛋白方式中的(8+1)小時(shí)階段的

3、水解產(chǎn)物具有相對(duì)較高的HMG-CoA還原酶抑制活性，此階段的水解產(chǎn)物在50mg/ml濃度下對(duì)HMG-CoA還原酶的抑制率為13.01％。 2.選擇同時(shí)具有離子交換與分子篩作用的CM-SephadexC50為層析材料對(duì)乳清蛋白源目標(biāo)活性肽進(jìn)行分離。洗脫方式采用pH(6.0～8.0)梯度線性洗脫，在三種磷酸鹽緩沖液(磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉)離子強(qiáng)度條件(10mmol/L，30mmol/L、50mmol/L)下，選擇能夠較好分離乳清蛋

4、白源高HMG-CoA還原酶抑制活性乳清蛋白活性肽的操作條件，結(jié)果表明：在以pH(6.0～8.0)梯度方式線性洗脫、30mmol/L離子強(qiáng)度為洗脫條件時(shí)，C50CM-Sephadex可將選擇的水解物分離出4個(gè)相對(duì)較窄的組分峰，其中第4組分峰在50mg/ml濃度下對(duì)HMG-CoA還原酶的最高抑制率達(dá)17.25％。對(duì)分離所得活性肽分子量范圍的定性采用了3％濃縮膠與17.5％分離膠組成的不連續(xù)系統(tǒng)的SDS-PAGE電泳法，電泳結(jié)果表明：具有較高

5、HMG-CoA還原酶抑制活性的第3、4組分中乳清蛋白源活性肽的分子量范圍大至介于2000～12000之間。 3.為了評(píng)價(jià)分離所得乳清蛋白源活性肽的生物學(xué)功能，將40只初始體重差異不顯著(p＞0.05)的昆明雄性小白鼠分成四組。在基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上，各試驗(yàn)組按照實(shí)驗(yàn)預(yù)先設(shè)定進(jìn)行處理：A組飼喂清水；B組飼喂乳清蛋白溶液；C組飼喂1、2洗脫組分；D組飼喂具較高HMG-CoA還原酶抑制活性的3、4洗脫組分，其中B、C、D三組飼喂添加物中N