褪黑素對(duì)牛卵泡內(nèi)膜細(xì)胞凋亡和類固醇生成的作用研究.pdf

1、卵泡內(nèi)膜細(xì)胞凋亡及類固醇生成在卵泡發(fā)育和閉鎖過程中發(fā)揮了重要作用。褪黑素調(diào)控卵泡內(nèi)膜中凋亡和類固醇生成的具體機(jī)制目前還不清楚，該研究對(duì)于進(jìn)一步闡明褪黑素在卵泡發(fā)育和閉鎖中的調(diào)控作用，促進(jìn)卵泡體外培養(yǎng)和應(yīng)用具有重要意義。本研究選擇牛3-4 mm卵泡在體外研究褪黑素對(duì)卵泡內(nèi)膜細(xì)胞類固醇生成及卵泡內(nèi)膜細(xì)胞凋亡的影響，并進(jìn)一步闡明具體的調(diào)控機(jī)制。研究結(jié)果如下:
　　1.褪黑素對(duì)牛卵泡內(nèi)膜細(xì)胞凋亡與類固醇生成的影響
　　用0 ng/m

2、L，1 ng/mL，10 ng/mL，100 ng/mL的褪黑素處理卵泡，撕取卵泡內(nèi)膜，RT-qPCR檢測(cè)卵泡內(nèi)膜細(xì)胞褪黑素受體MT1、MT2的表達(dá)，結(jié)果顯示10 ng/mL的褪黑素對(duì)褪黑素受體MT1、MT2的促進(jìn)效果最明顯。卵泡培養(yǎng)液中添加10 ng/mL的褪黑素處理，RT-qPCR檢測(cè)撕取的卵泡內(nèi)膜LHR，類固醇生成相關(guān)基因及凋亡基因BCL2、BAX、CASPASE的表達(dá)，Elisa檢測(cè)卵泡培養(yǎng)上清中雄烯二酮和孕酮的分泌。結(jié)果顯示褪

3、黑素顯著促進(jìn)LHR和STAR的表達(dá)，顯著促進(jìn)孕酮的分泌，顯著促進(jìn)抗凋亡基因BCL2的表達(dá)，BCL2和BAX比率增加。用10 ng/mL褪黑素處理體外培養(yǎng)的卵泡內(nèi)膜細(xì)胞，使用TUNEL染色法檢測(cè)細(xì)胞的凋亡情況，染色結(jié)果顯示褪黑素處理組的凋亡率低于對(duì)照組。本研究表明褪黑素影響卵泡中卵泡內(nèi)膜細(xì)胞類固醇的生成，抑制卵泡內(nèi)膜細(xì)胞的凋亡。
　　2.MT1和MT2介導(dǎo)褪黑素對(duì)卵泡內(nèi)膜細(xì)胞凋亡與類固醇生成的作用
　　在含有10 ng/mL褪

4、黑素的卵泡培養(yǎng)液中添加10μM褪黑素受體非特異性的抑制劑Luzindole或10μM MT2特異性抑制劑4P-PDOT處理，RT-qPCR檢測(cè)撕取的卵泡內(nèi)膜細(xì)胞褪黑素受體MT1、MT2和LHR、STAR，抗凋亡基因BCL2的表達(dá)，Elisa檢測(cè)卵泡培養(yǎng)上清中孕酮的分泌。結(jié)果顯示，添加Luzindole后顯著抑制褪黑素誘導(dǎo)的MT1和MT2的表達(dá)，添加4P-PDOT后顯著抑制MT2的表達(dá);添加Luzindole或4P-PDOT處理均顯著抑制

5、褪黑素誘導(dǎo)的LHR、STAR、BCl2的表達(dá);添加Luzindole處理顯著抑制孕酮的分泌。本研究表明MT1和MT2介導(dǎo)褪黑素對(duì)卵泡內(nèi)膜細(xì)胞凋亡和類固醇生成的調(diào)控作用。
　　3.PI3K/AKT通路介導(dǎo)褪黑素對(duì)卵泡內(nèi)膜細(xì)胞凋亡與類固醇生成的作用
　　在含有10 ng/mL褪黑素的卵泡培養(yǎng)液中添加25μM通路抑制劑LY294002處理，RT-qPCR檢測(cè)撕取的卵泡內(nèi)膜細(xì)胞LHR、STAR及抗凋亡基因BCL2的表達(dá)，Elisa檢