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文檔簡介
1、本課題目的就是探討NPY及其受體(Y1R和Y2R)在垂體腺瘤中的表達及其生物學(xué)意義。為此本實驗首先通過雌激素誘導(dǎo)建立大鼠垂體泌乳素腺瘤模型,研究大鼠下丘腦和垂體中NPY及其受體的表達規(guī)律及其意義。在動物實驗的基礎(chǔ)上,本課題還探討了NPY及其受體在人垂體腺瘤中的表達特征及其生物學(xué)意義。具體做了以下工作: 第一部分動物實驗?zāi)康难芯可窠?jīng)肽Y及其受體在實驗大鼠垂體腺瘤以及下丘腦中的表達,探索NPY在垂體腺瘤形成過程中的作用。方法4周齡雌
2、性Wistar大鼠40只,摘除雙側(cè)卵巢后,將大鼠隨機等分為實驗組和對照組。通過腹腔注射雌激素的方法建立大鼠垂體腺瘤模型,經(jīng)內(nèi)分泌和組織病理學(xué)檢查對動物模型進行鑒定并確定其內(nèi)分泌類型。采用放射免疫法測定大鼠血漿NPY的濃度,應(yīng)用免疫組化、免疫電鏡和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)的方法分別研究兩組大鼠下丘腦和垂體中NPY及其受體(Y1R和Y2R)的表達。結(jié)果(1)實驗組大鼠垂體重量為(52.35±4.97)mg,血清泌乳素濃度為(198
3、.23±93.07)ng/ml,大約是對照組垂體重量(12.02±0.77)mg和泌乳素濃度(50.12±14.24)ng/ml的4倍,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001);實驗組大鼠血漿NPY濃度為(6865.52±2898.31)pg/ml,明顯低于對照組血漿中NPY的濃度(9889.71±3779.19)pg/ml,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);實驗組垂體正常結(jié)構(gòu)消失,腺細胞形態(tài)多樣,排列紊亂,細胞核深染有異型性,而且可見紅細胞
4、溢出現(xiàn)象,符合垂體腺瘤的病理診斷標(biāo)準(zhǔn);免疫組化染色顯示實驗組垂體腺瘤中泌乳素的表達水平顯著增高。(2)免疫組化和RT-PCR研究表明,在實驗組大鼠下丘腦和垂體腺瘤中NPY的表達水平顯著低于對照組。(3)實驗組大鼠垂體腺瘤中Y1R和Y2R基因表達明顯低于對照組垂體。(4)實驗組大鼠下丘腦中Y1R基因表達明顯低于對照組,但兩組間大鼠下丘腦Y2R的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義。(5)免疫電鏡研究顯示NPY主要位于腺垂體細胞的分泌顆粒中。結(jié)論通過雌激素
5、誘導(dǎo)Wistar大鼠,成功建立了垂體泌乳素腺瘤動物模型;實驗組大鼠下丘腦中NPY及其Y1R的表達下調(diào)與垂體腺瘤的發(fā)生有關(guān),NPY可能通過下丘腦中Y1R參與調(diào)節(jié)垂體泌乳素腺瘤的形成;實驗組大鼠垂體腺瘤中NPY及其受體(Y1R和Y2R)的表達下調(diào)可能與腫瘤的發(fā)生有關(guān)。 第二部分臨床研究目的研究神經(jīng)肽Y及其受體在人垂體腺瘤中的表達,探索NPY對垂體腺瘤發(fā)生、發(fā)展以及其它生物學(xué)行為的影響。方法收集垂體腺瘤手術(shù)標(biāo)本以及相關(guān)臨床資料。通過免
6、疫組化觀察NPY在人垂體腺瘤中的表達特征,研究NPY的表達水平與不同類型垂體腺瘤的關(guān)系;采用免疫電鏡觀察NPY在垂體腺瘤亞細胞水平的定位表達,進一步尋找NPY表達的組織學(xué)依據(jù);通過分子生物學(xué)方法測定垂體腺瘤組織中NPY及其受體的基因表達,研究其表達水平與腫瘤內(nèi)分泌的關(guān)系;同時應(yīng)用原位雜交技術(shù)進一步研究Y1R和Y2R在垂體腺瘤細胞水平的分布特征及生物學(xué)意義。結(jié)果(1)人垂體腺瘤中存在NPY及其受體(Y1R和Y2R)表達,而且在不同類型垂體
7、腺瘤中NPY及其Y2R表達存在顯著差異,在促性腺細胞腺瘤中的表達水平最高,而在泌乳素腺瘤中表達最低;垂體腺瘤中NPY與Y2R的表達呈正相關(guān);生長激素腺瘤中NPY基因表達水平與血清GH濃度呈正相關(guān)。(2)免疫電鏡顯示NPY主要位于垂體腫瘤細胞的分泌顆粒中,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和細胞基質(zhì)也有散在分布。(3)在侵襲和非侵襲性垂體腺瘤之間NPY及其受體(Y1R和Y2R)的表達無明顯差異(P>0.05)。(4)原位雜交研究顯示垂體腫瘤細胞和瘤內(nèi)血管內(nèi)皮細胞
8、中均存在Y1R和Y2R基因表達,而且腫瘤血管內(nèi)皮細胞中Y2R表達水平明顯高于Y1R。(5)卒中組垂體腺瘤中NPY及其Y2R表達水平明顯高于非卒中組腺瘤,而且Y2R的表達差異主要存在于腫瘤的血管內(nèi)皮細胞。結(jié)論(1)NPY及其受體(Y1R和Y2R)在垂體腺瘤中存在表達,而且表達水平與垂體腺瘤的生物學(xué)行為有關(guān)。(2)NPY及其受體(Y1R和Y2R)參與調(diào)節(jié)垂體腺瘤的內(nèi)分泌功能。(3)NPY可能通過Y2R調(diào)節(jié)垂體腺瘤的病理性血液循環(huán)。(4)NP
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