TRAIL受體DR5與Ki67在原代白血病細(xì)胞的表達(dá)和意義.pdf

1、背景和目的：腫瘤壞死因子相關(guān)細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)配體(tumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand，TRAIL)是TNF超家族的新成員，誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞凋亡，而對(duì)大多數(shù)正常細(xì)胞無(wú)影響。其誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡是通過(guò)它的受體介導(dǎo)完成的，TRAIL與其特異受體(DR5或DR4)結(jié)合，募集Fas相關(guān)死亡域(FADD)，進(jìn)而激活caspase-8，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。目前已發(fā)現(xiàn)5種受體：死亡受體DR4、

2、DR5傳遞死亡信號(hào)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。可溶性受體(OPG)、誘騙受體DcR1和DcR2均不能傳遞TRAIL的死亡信號(hào)。DR5的表達(dá)水平在TRAIL誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡方面起著十分重要的作用，不同腫瘤細(xì)胞表面DR5的表達(dá)水平不同。致DNA損傷的一些化療藥物可上調(diào)某些實(shí)體瘤細(xì)胞DR5的表達(dá)水平，從而增加腫瘤細(xì)胞對(duì)TRAIL所致凋亡的敏感性，導(dǎo)致TRAIL介導(dǎo)的凋亡增加。Ki67是一種細(xì)胞增殖核抗原，它與有絲分裂活動(dòng)關(guān)系密切，出現(xiàn)于除G0期以外的G1

3、、S、G2和M期的細(xì)胞增殖周期中，有絲分裂后Ki67蛋白迅速降解或失去抗原決定簇。故有學(xué)者認(rèn)為Ki67是一種周期相關(guān)抗原。Ki67抗原在急性白血病中的表達(dá)水平因細(xì)胞周期的不同而存在差別，于細(xì)胞周期的S晚期階段和G2期表達(dá)最高，是反映急性白血病細(xì)胞增殖狀態(tài)的一種客觀指標(biāo)。然而關(guān)于Ki67表達(dá)水平與急性白血病誘導(dǎo)緩解治療效果之間的關(guān)系，文獻(xiàn)報(bào)道不多。本研究應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)方法，觀察了常用化療藥物對(duì)急性白血病原代細(xì)胞表達(dá)DR5

4、的影響，以探討TRAIL誘導(dǎo)的調(diào)亡途徑在急性白血病化療中的作用；并采用免疫組化染色測(cè)定原代白血病細(xì)胞中Ki67的表達(dá)，探討原代白血病細(xì)胞的增殖狀態(tài)以及Ki67的表達(dá)與臨床療效的關(guān)系。 材料與方法：(1)病例資料：56例初治急性白血病患者的骨髓樣本均取自鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院血液科2005年4月～2005年12月門診及住院患者。平均年齡：40歲(13歲～74歲)，其中男37例，女19例。經(jīng)過(guò)血常規(guī)和骨髓細(xì)胞學(xué)檢查確診，符合1985年

5、FAB診斷標(biāo)準(zhǔn)。 (2)研究分組：研究對(duì)象分為兩組，其中一組10例急性白血病患者用于TRAIL受體DR5的檢測(cè)；另一組46例急性白血病患者用于Ki67表達(dá)的檢測(cè)。 (3)Ki67在白血病細(xì)胞表達(dá)的檢測(cè)：急性白血病患者46例，其中20例ALL患者，26例ANLL患者；對(duì)照組為15例骨髓涂片大致正常的非惡性血液病患者。取肝素抗凝骨髓1ml，經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液分離單個(gè)核細(xì)胞，制片，用免疫組織細(xì)胞化學(xué)染色方法檢測(cè)Ki67蛋白的表達(dá)

6、水平，以陽(yáng)性細(xì)胞標(biāo)記指數(shù)表示。 (4)DR5在培養(yǎng)的骨髓單個(gè)核細(xì)胞膜表達(dá)的測(cè)定：10例急性白血病患者(ALL2例，ANLL8例)和5例骨髓涂片大致正常的非惡性血液病患者，取骨髓5ml，經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液分離單個(gè)核細(xì)胞，急性白血病患者BMMNC分6組懸浮于RPMI-1640含20％FBS培養(yǎng)液內(nèi)，在37°C、5％CO2飽和濕度的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)：①未處理組；②Acl處理組；③VP-16處理組；④Ara-c處理組；⑤Acl+Ara-c處理

7、組和⑥VP-16+Ara-c處理組。培養(yǎng)72h后，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)DR5在BMMNC的表達(dá)水平，以平均熒光強(qiáng)度表示。 (5)療效觀察：在住院接受治療的患者中，ANLL接受標(biāo)準(zhǔn)蒽環(huán)類藥物聯(lián)合阿糖胞苷(3+7)方案，ALL接受標(biāo)準(zhǔn)VDCP方案作為誘導(dǎo)緩解治療，1個(gè)療程結(jié)束3周后，根據(jù)血常規(guī)和骨髓細(xì)胞學(xué)檢查判斷療效。療效標(biāo)準(zhǔn)參照張之南主編的《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》(第二版)。 (6)采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，

8、對(duì)計(jì)量資料先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊同的進(jìn)行多組間單因素方差分析，兩組間比較進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。 結(jié)果：(1)DR5在急性白血病患者培養(yǎng)的BMMNC中表達(dá)水平較低，平均熒光強(qiáng)度(MFI)為13.22±4.03。對(duì)照組表達(dá)DR5的平均熒光強(qiáng)度(MFI)為8.15±3.86，兩組之間無(wú)明顯差異(P＞0.05)。 (2)Ki67在對(duì)照組BMMNC的陽(yáng)性細(xì)胞標(biāo)記指數(shù)(LI)為11.66

9、±14.63％，而急性白血病患者BMMNC的陽(yáng)性細(xì)胞標(biāo)記指數(shù)為42.48±25.78％，兩組之間相比存在顯著性差異(P＜0.05)。其中26例ANLL的BMMNC的陽(yáng)性細(xì)胞標(biāo)記指數(shù)為39.50±24.14％，20例ALL的BMMNC的陽(yáng)性細(xì)胞標(biāo)記指數(shù)為49.36±27.91％，兩者之間有差別但無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。(3)化療藥物對(duì)急性白血病患者BMMNC表達(dá)TRAIL受體DR5的影響急性白血病患者BMMNC經(jīng)過(guò)分組培養(yǎng)后，其DR

10、5表達(dá)水平(MFI)分別為①未處理組13.22±4.03；(②)Acl處理組41.08±14.27；③VP-16處理組14.32±5.25；④Ara-c處理組13.78±6.27：⑤Acl+Ara-c處理組47.19±15.16和⑥VP-16+Ara-c處理組14.29±6.30。與未處理組相比，Acl上調(diào)DR5在急性白血病患者BMMNC的表達(dá)水平(P＜0.05)；而VP-16和Ara-c對(duì)DR5的表達(dá)無(wú)明顯影響(P＞0.05)。Ara

11、-c協(xié)同Acl對(duì)DR5在急性白血病患者BMMNC表達(dá)的誘導(dǎo)作用，而VP-16聯(lián)合Ara-c對(duì)DR5在急性白血病患者BMMNC表達(dá)無(wú)顯著影響(P＞0.05)。(4)DR5表達(dá)與臨床療效的關(guān)系在臨床可供評(píng)價(jià)的8例接受AA方案治療的ANLL患者中，6例CR者，其BMMNC在體外經(jīng)Acl+Ara-c處理后，DR5表達(dá)水平為50.10±15.67：2例NR者DR5表達(dá)水平分別為37.83和33.29，但兩組之間比較無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。

12、 (5)Ki67在BMMNC的陽(yáng)性細(xì)胞標(biāo)記指數(shù)與臨床療效的關(guān)系在臨床療效可供分析的22例急性白血病患者中，15例ANLL患者接受標(biāo)準(zhǔn)劑量蒽環(huán)類藥物聯(lián)合阿糖胞苷方案治療，7例ALL患者接受標(biāo)準(zhǔn)劑量VDCP方案，以Ki67陽(yáng)性細(xì)胞標(biāo)記指數(shù)均數(shù)32％為界，分成Ki67LI低表達(dá)(≤32％)和Ki67LI高表達(dá)(＞32％)兩個(gè)觀察組，比較兩組患者對(duì)首次化療療效的反應(yīng)。結(jié)果表明，Ki67LI高表達(dá)組CR率50.00％低于Ki67LI低表達(dá)組

13、CR率85.71％，兩組之間存在顯著性差異(P＜0.05)。 結(jié)論：(1)急性白血病原代細(xì)胞低水平表達(dá)TRAIL受體DR5。 (2)Acl等上調(diào)TRAIL受體DR5在急性白血病細(xì)胞的表達(dá)。 (3)體外檢測(cè)Acl對(duì)TRAIL受體DR5在急性白血病細(xì)胞表達(dá)的影響，與臨床應(yīng)用AA方案治療ANLL的療效可能相關(guān)。 (4)Ki67在急性白血病細(xì)胞的表達(dá)明顯高于對(duì)照組，而Ki67表達(dá)相對(duì)較高者，其臨床療效差，提示Ki