異丙酚對熱應激大鼠體內(nèi)β-內(nèi)啡肽表達的影響.pdf

1、目的：觀察分別用異丙酚或10％水合氯醛全身麻醉下42℃全身高溫30 min建立熱應激模型大鼠下丘腦和血漿β-內(nèi)啡肽的表達、海馬區(qū)神經(jīng)元凋亡情況和熱痛閾的改變情況；研究異丙酚對全身高溫大鼠下丘腦和血漿β-內(nèi)啡肽含量的影響并探討其在此過程中的神經(jīng)元保護和應激鎮(zhèn)痛等方面的臨床意義。 方法： 1.動物分組及模型制備隨機將72只實驗鼠分為3組：對照組（C組）、熱應激模型組（M組）和異丙酚麻醉高溫組（HP組），M組和HP組再分為高溫

2、后2h、6h、12h、24 h4個亞組（分別記為T1、T2、T3、T4），每組8只，C組8只（記為T0）。對照組只普通實驗室喂養(yǎng)，不進行特殊處理。高溫應激組分別用10％水合氯醛3.0 mL·kg-1或異丙酚100 mg·kg-1腹腔注射全身麻醉后，仰臥位固定于手術臺上，采用紅外線輻射型加溫裝置（450W，50Hz）距離大鼠40 cm全身均勻照射加溫建立熱應激模型，同時將電子測溫儀探頭插入直腸3～4 cm監(jiān)測直腸溫，使大鼠直腸溫度升高至4

3、2℃并保持30 min。高溫過程中用微量泵以16 mL·kg-1·h-1的速度經(jīng)腹腔補充平衡鹽液，及時補充液體使體內(nèi)的水、電解質(zhì)均維持在正常范圍內(nèi)。 2.大鼠熱痛閾測定將大鼠固定在特制塑料筒內(nèi)，右后肢置于筒外，待大鼠安靜后用輻射熱源（450W，50Hz）距離大鼠20 cm照射其右后足墊部，記錄照射開始至大鼠出現(xiàn)縮足逃避反射的時間間隔，即熱刺激回縮潛伏期（paw withdrawal thermal latency， PWTL），

4、相鄰兩次照射間隔3分鐘，共重復測定3次，取平均值作為熱痛閾。為防止過度受熱損傷，控制持續(xù)照射時間小于60 s。 3.β-內(nèi)啡肽指標測定熱應激組大鼠分別于高溫后2h、6h、12 h、24 h時測定大鼠熱痛閾，然后快速處死動物，斷頭取腦、取血，按解剖結(jié)構(gòu)分離腦區(qū)，取丘腦部分，吸去血跡，稱重，快速加入1 mL生理鹽水研磨，勻漿后4℃3000 rpm離心15 min取上清，置-20℃低溫冰箱保存待測。取靜脈血2mL，注入含有7.5％ED

5、TA·Na2 30μL和抑肽酶40μL的試管中，4℃3000 rpm離心10 min取上清，置-20℃低溫冰箱保存待測。對照組大鼠不進行高溫處理，僅測定熱痛閾，取腦、取血，操作同高溫組。β-內(nèi)啡肽的檢測嚴格按照放射免疫測定盒使用說明書進行，計算每mg丘腦組織和每mL血漿中β-內(nèi)啡肽的含量。 4.神經(jīng)元凋亡測定 取部分海馬區(qū)腦組織，放于4％多聚甲醛磷酸緩沖液浸泡固定24 h，后連續(xù)冰凍切片，原位末端脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導dUT

6、P標記（TUNEL）法檢測神經(jīng)元凋亡。按說明書操作，DAB顯色，光鏡下觀察，細胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒者為TUNEL陽性細胞，即凋亡細胞。高倍鏡下（400×）分別連續(xù)計數(shù)100個神經(jīng)元細胞，計數(shù)TUNEL陽性細胞個數(shù)的平均值，凋亡率=TUNEL陽性細胞數(shù)％。 5.統(tǒng)計學處理采用隨機分組設計，應用SPSS15.0統(tǒng)計軟件分析，計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，采用方差分析比較各組間變量的差異，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

7、 結(jié)果： 1.熱痛閾的比較。 與C組相比，M組和HP組熱痛閾升高（P<0.05）；與M組相比，HP組在T2、T3時升高（P<0.05），在T1、T4時比較差別無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。 2.下丘腦β-內(nèi)啡肽水平比較。 與C組相比，M組和HP組丘腦β-內(nèi)啡肽含量均明顯升高（P<0.05）；與M組相比，HP組β-內(nèi)啡肽表達在T2、T3時升高（P<0.05），在T1、T4時比較差別無統(tǒng)計學意義（P>0.0

8、5）。 3.血漿β-內(nèi)啡肽水平比較。 與C組相比，M組在T1時點和HP組在T1、T2和T3時點血漿β-內(nèi)啡肽含量均明顯升高（P<0.05）；與M組相比，H組血漿β-內(nèi)啡肽表達在T2、T3時升高（-P<0.05），在T1、T4時比較差別無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。 4.高溫后海馬神經(jīng)元凋亡情況 對照組神經(jīng)元形態(tài)正常，高溫組在24 h后出現(xiàn)較多免疫陽性凋亡細胞，呈棕黃或棕褐色染色，凋亡神經(jīng)元體積縮小，外形不規(guī)則，

9、核染色質(zhì)濃縮、邊聚，附著于核膜內(nèi)表面成新月形或環(huán)狀，有凋亡小體形成。與C組相比，M組和HP組凋亡神經(jīng)元增多（P<0.05）；與M組比較，HP組凋亡神經(jīng)元百分比降低（P<0.05）。 結(jié)論：全身高溫可使大鼠體內(nèi)應激激素劇烈增加，β-內(nèi)啡肽既是一種應激激素又是體內(nèi)重要的內(nèi)源性鎮(zhèn)痛物質(zhì)，可減弱機體在高溫反應中對熱和疼痛刺激的不良生理反應。熱應激過程能增加大鼠下丘腦β-內(nèi)啡肽的表達并提高其熱痛閾，從而發(fā)揮一定程度的止痛作用；全身高溫過程